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近年来,全球食品安全恶性事件频发,成为影响公共健康的重要因素,食品安全问题越来越成为社会关注的热点。我国流行的食源性疾病中,细菌性食物中毒居首位,因此,食品中病原性细菌检测是食品卫生安全检测中一个重要的部分。目前检测食源性致病菌主要采用分离、培养然后生化鉴定的方法,不仅操作繁琐,检测周期较长,且每次只能检出一种细菌,一般需要一周左右才能提交检测报告,而且敏感度、特异性均较低。面对日益增加的多重混合污染,目前的检测方法显得滞后,因此建立快速、高效、准确的食源性致病菌的检测方法变得越来越迫切。多重PCR是在同一个PCR反应体系中同时加入了多对引物,从而实现了在同一体系中对多个目的片段的同时扩增,克服了常规PCR方法一次只能扩增个目的片段的缺点,从而为实现多种食源性致病菌的快速同时检测,节省了成本和时间,多重PCR检测方法有着更为广阔的发展空间。为建立一种同时检测四种常见致病菌的PCR方法,设计并筛选4对特异性引物,PCR扩增的目的基因片段长度分别为366bp、113bp、155bp、283bp。首先建立单重PCR检测体系,对标准菌株进行扩增并确定检测的特异性和灵敏度。经测序验证其同源性高达99%,特异性良好,灵敏度达101cfu/ml,从而为下步多重PCR检测体系的建立奠定了基础。建立多重PCR反应体系,根据影响多重PCR的主要因素,引物浓度,dNTP浓度,Taq酶浓度,Mg2+浓度设计了L9(34)正交实验寻找最优的反应条件,并对退火温度进行了优化。最终反应体系50μ1。同时建立了两步法PCR扩增体系和循环条件,结果表明这4株致病菌均有清晰、特异的目标条带,志贺氏菌和单增李斯特菌的灵敏度达到l01cfu/ml,0157：H7和金黄色葡萄球菌的敏感性达到了102cfu/ml,因此,本研究所建立的检测四种病原菌的多重PCR体系的灵敏度达到了1.8×103cfu/ml。同时以国标法为对照,对人为接种致病菌的牛奶样品进行检测,和送检商品等样本共84份进行多重PCR检测,样品检测前用LB增菌液进行前增菌,结果表明,采用多重PCR方法简单快速且灵敏度高,整个检测时间在24 h以内,与国标法相比,应用多重PCR在84份样品检测中无假阴性,假阳性低于2%。本实验建立的多重PCR方法灵敏度高,特异性好,可以实现对样品的快速检测,在检测食品中志贺氏菌,金黄色葡萄球菌,肠出血性大肠杆菌0157：H7,单核细胞增生性李斯菌中有广阔的应用前景,同时对控制病原菌传播,预防食物中毒的发生也有积极意义。