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马尾松(Pinus massoniana Lamb.)是中国南部重要用材树种,也是中国松脂来源的主要树种,是山区林业经济的重要组成部分,其适应能力强,生长迅速,综合利用程度高,作为材脂兼用树种广泛种植,是林业的支柱产业之一。随着全球气候变暖和水资源紧缺加剧,尤其是近年来南方频发的季节性干旱,严重威胁马尾松生长和造林成活率,影响马尾松林经济效益,对马尾松产业、生态环境及社会、经济的可持续发展造成重大影响。探究林木抗旱适应机理,定向改良培育抗旱品系,是应对干旱胁迫的一种经济有效措施。为此,本文以马尾松二代种子园家系作为材料,根据干旱胁迫下的生长和形态指标,评价马尾松家系抗旱性,筛选抗旱家系。通过持续干旱胁迫,研究抗旱型家系和敏感型家系根系的生理响应、细胞形态变化、转录组学和代谢组学差异,进而探究抗旱家系响应干旱胁迫的生理和分子特征,揭示马尾松抗旱机制,为马尾松抗旱材料的培育提供理论依据。主要结果如下:
(1)评价马尾松二代种子园54个家系抗旱性,其中19-220、19-242和19-249等14份材料的综合抗旱度量D值平均为0.644,属于高抗旱型家系,19-208、19-223和19-248等11份材料的综合抗旱度量D值平均为0.275,属于干旱敏感家系。根据生长状态,选择抗旱家系PmT(19-242)和干旱敏感家系PmS(19-223)进行后续的生理与分子实验。
(2)干旱胁迫下不同抗旱性马尾松根系生理指标变化较大,随着干旱胁迫程度增加,MDA含量随之增加,重度干旱达到峰值,PmT和PmS家系分别为24.62nmol/L和28.41nmol/L;SOD活性在轻度干旱最高,PmT家系的达到376.88U/g,PmS家系的310.41U/g。Pro含量在重度干旱达到峰值,PmS家系为328.38μg/g;PmT家系为515.09μg/g。轻度干旱主要以提高保护酶活性响应干旱胁迫,清除过氧化物,重度干旱主要以增加渗透调节物含量抵御和适应干旱逆境。
(3)干旱胁迫下不同抗旱性马尾松根系细胞形态变化明显,轻度干旱细胞形态轻微变形,表皮和皮层细胞脱水出现不同程度皱缩,中柱细胞排列变疏松,细胞间隙变大。重度干旱细胞出现破裂和崩溃现象,PmS家系细胞出现破裂的损伤更严重,PmT家系受损程度相对较轻。复水处理后,PmT家系皮层细胞大部分能恢复相对完整形态。
(4)干旱胁迫下不同抗旱性马尾松根系转录组差异较大,轻度干旱下PmT家系与PmS家系比较,DEGs数目为10011个,其中3159个上调,6852个下调。重度干旱下PmT家系与PmS家系比较,DEGs数目为6118个,其中1612个上调,4506个下调。轻度干旱下马尾松差异基因数最多,响应干旱胁迫分子活动最为活跃。对差异表达基因进行GO富集分析显示,不同干旱胁迫程度下DEGs均被显著富集到3个生物学功能,新陈代谢、刺激响应和抗氧化活性,这些生物学功能基因与马尾松响应干旱胁迫有关。对差异表达基因进行KEGG富集分析发现,不同干旱胁迫程度下DEGs均被显著富集3个代谢途径,分别是植物激素信号传导、苯丙烷类生物合成和类黄酮生物合成,这些功能基因和代谢通路与马尾松应答干旱胁迫有关。
(5)干旱胁迫下不同抗旱性马尾松根系代谢组差异较大,共检测到628种代谢产物,轻度干旱共鉴定出91个差异表达代谢物(60个上调,31个下调)。重度干旱下共鉴定出97个差异表达代谢物(46个上调,51个下调),复水处理后共鉴定出84个差异表达代谢物(65个上调,19个下调)。随着干旱胁迫程度加深,响应干旱上调差异代谢物数逐渐增多。对差异表达代谢物进行KEGG富集分析发现,不同干旱胁迫程度下DEMs均被显著富集3个代谢途径,分别是植物激素信号传导、苯丙烷类生物合成和类黄酮生物合成,与马尾松应答干旱胁迫有关,具有关键性的调控作用。
(1)评价马尾松二代种子园54个家系抗旱性,其中19-220、19-242和19-249等14份材料的综合抗旱度量D值平均为0.644,属于高抗旱型家系,19-208、19-223和19-248等11份材料的综合抗旱度量D值平均为0.275,属于干旱敏感家系。根据生长状态,选择抗旱家系PmT(19-242)和干旱敏感家系PmS(19-223)进行后续的生理与分子实验。
(2)干旱胁迫下不同抗旱性马尾松根系生理指标变化较大,随着干旱胁迫程度增加,MDA含量随之增加,重度干旱达到峰值,PmT和PmS家系分别为24.62nmol/L和28.41nmol/L;SOD活性在轻度干旱最高,PmT家系的达到376.88U/g,PmS家系的310.41U/g。Pro含量在重度干旱达到峰值,PmS家系为328.38μg/g;PmT家系为515.09μg/g。轻度干旱主要以提高保护酶活性响应干旱胁迫,清除过氧化物,重度干旱主要以增加渗透调节物含量抵御和适应干旱逆境。
(3)干旱胁迫下不同抗旱性马尾松根系细胞形态变化明显,轻度干旱细胞形态轻微变形,表皮和皮层细胞脱水出现不同程度皱缩,中柱细胞排列变疏松,细胞间隙变大。重度干旱细胞出现破裂和崩溃现象,PmS家系细胞出现破裂的损伤更严重,PmT家系受损程度相对较轻。复水处理后,PmT家系皮层细胞大部分能恢复相对完整形态。
(4)干旱胁迫下不同抗旱性马尾松根系转录组差异较大,轻度干旱下PmT家系与PmS家系比较,DEGs数目为10011个,其中3159个上调,6852个下调。重度干旱下PmT家系与PmS家系比较,DEGs数目为6118个,其中1612个上调,4506个下调。轻度干旱下马尾松差异基因数最多,响应干旱胁迫分子活动最为活跃。对差异表达基因进行GO富集分析显示,不同干旱胁迫程度下DEGs均被显著富集到3个生物学功能,新陈代谢、刺激响应和抗氧化活性,这些生物学功能基因与马尾松响应干旱胁迫有关。对差异表达基因进行KEGG富集分析发现,不同干旱胁迫程度下DEGs均被显著富集3个代谢途径,分别是植物激素信号传导、苯丙烷类生物合成和类黄酮生物合成,这些功能基因和代谢通路与马尾松应答干旱胁迫有关。
(5)干旱胁迫下不同抗旱性马尾松根系代谢组差异较大,共检测到628种代谢产物,轻度干旱共鉴定出91个差异表达代谢物(60个上调,31个下调)。重度干旱下共鉴定出97个差异表达代谢物(46个上调,51个下调),复水处理后共鉴定出84个差异表达代谢物(65个上调,19个下调)。随着干旱胁迫程度加深,响应干旱上调差异代谢物数逐渐增多。对差异表达代谢物进行KEGG富集分析发现,不同干旱胁迫程度下DEMs均被显著富集3个代谢途径,分别是植物激素信号传导、苯丙烷类生物合成和类黄酮生物合成,与马尾松应答干旱胁迫有关,具有关键性的调控作用。