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目的探讨CB2受体、脊髓自噬和胶质细胞在骨癌痛形成和维持中的作用,以及三者之间的关系。方法通过体外培养和腹水传代增殖Walker 256乳腺癌细胞,接种于SD雌性大鼠胫骨骨髓腔中,建立大鼠骨癌痛模型。应用机械缩足阈值(Paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和自由行走痛行为学评分评估大鼠痛行为学的表现。用脊髓Beclin1蛋白表达水平反应自噬的水平,用胶质细胞纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、OX-42、IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α的表达水平反应脊髓胶质细胞的活化程度。通过腹腔注射JWH-015、AM630、DMSO,鞘内注射JWH-015、AM630、DMSO、自噬诱导剂雷帕霉素、自噬抑制剂3甲基腺嘌吟(3-methyladenine,3-MA)进行分组干预。观察不同时间点各组大鼠痛行为学的变化,Western Blot检测脊髓CB2受体、IL-lβ、IL-6、IL-18、TNF-a和Beclin 1蛋白表达的变化。免疫荧光技术观察脊髓背角GFAP和OX-42的表达。结果(1)与假手术组相比,大鼠胫骨接种Walker 256乳腺癌细胞后出现进行性的痛行为学变化,表现为机械缩足阈值的降低、自由行走痛行为学评分的升高(P<0.01);(2)大鼠胫骨接种Walker256乳腺癌细胞后脊髓CB2受体蛋白表达水平进行性的升高(P<0.01);(3)大鼠胫骨接种Walker256乳腺癌细胞后早期激活脊髓背角小胶质细胞,随后激活星型胶质细胞,表现为脊髓IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α蛋白表达水平进行性升高及脊髓背角OX-42、GFAP免疫阳性反应的增加(P<0.05);(4)大鼠胫骨接种Walker256乳腺癌细胞后脊髓自噬水平明显降低,表现为Beclin1蛋白表达水平的明显降低(P<0.05);(5)无论腹腔还是鞘内注射CB2受体激动剂JWH-015能时间依赖性的减轻骨癌痛大鼠的痛行为学改变(P<0.05),预先予以CB2受体抑制剂AM630能够逆转这一效应;(6)鞘内注射CB2受体激动剂JWH-015能够时间依赖性的抑制脊髓背角星型胶质细胞的活化,表现为脊髓背角GFAP免疫阳性反应的下降,脊髓IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α蛋白表达水平的下降(P<0.05),预先予以CB2受体抑制剂AM630能够逆转这一效应;(7)鞘内注射CB2受体激动剂JWH-015能够显著上调脊髓自噬水平,表现为脊髓Beclin1蛋白表达水平的升高(P<0.05),预先予以CB2受体抑制剂AM630能够逆转这一效应;(8)鞘内注射自噬诱导剂雷帕霉素能够增强脊髓自噬,抑制脊髓背角星型胶质细胞的活化,减轻骨癌痛大鼠痛行为学改变(P<0.05);鞘内注射自噬抑制剂3-MA则出现相反的效果。结论自噬可以通过调节脊髓星型胶质细胞的活化参与骨癌痛的形成和维持,JWH-015对骨癌痛大鼠产生明显的镇痛效应,这可能与上调脊髓自噬水平,抑制脊髓星型胶质细胞的活化有关。