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实验目的观察不同浓度的三氧化二砷(ATO)、尼洛替尼(AMN107)对慢粒急变K562细胞株诱导分化作用及两药联合在诱导分化是否有协同作用,初步探讨两药诱导分化作用的机制,为慢性粒细胞白血病急变的临床治疗提供实验依据。实验方法以慢粒急变期K562细胞为研究对象,先用不同浓度三氧化二砷(0.1,0.5,1.0,2.0,5.0μmol/L)作用于K562细胞,MTT法检测K562细胞生长情况；联苯胺染色检测血红蛋白含量变化；流式细胞术检测K562细胞表面巨核系分化抗原CD41、红系分化抗原GPA表达量；RT-PCR检测造血分化因子BTG1、 TAL1mRNA表达量及Western blot检测BTG1、TAL1蛋白表达量。然后再分别用0.005μmol/L尼洛替尼与1μmol/L三氧化二砷单独或联合作用K562细胞24、48、72h, MTT法检测K562细胞生长抑制率及在抑制增殖方面有无协同作用；瑞氏吉姆萨染色观察细胞分化形态；联苯胺染色检测血红蛋白含量,观察是否向红系分化；流式细胞术检测K562细胞表面巨核系分化抗原CD41、红系分化抗原GPA、粒系分化抗原CDl1b、单核系分化抗原CD14表达量；RT-PCR检测造血分化因子BTG1、TAL1mRNA表达量及Western blot检测BTG1、TAL1蛋白表达量。实验结果MTT及形态学结果显示各浓度组ATO对K562细胞的增殖都有抑制作用,且呈现一定浓度和时间依赖性,以浓度为5μmol/L的ATO于72h最为显著。经1μmol/L ATO诱导后,联苯胺阳性细胞率由对照组2.87%±0.63%升高至17.63%±1.18%(P<0.01),其红系分化特异标志GPA由对照组的3.39%±0.84%增加至68.46%±3.67%(P<0.01),巨核系CD41表达升高,但没有GPA明显,同时伴随着分化相关转录因子TAL1、BTG1mRNA及蛋白表达量升高。与对照组相比,单药ATO组、AMN107组及联用组对K562细胞的增殖都有抑制作用(P<0.01),且与时间及剂量呈正相关。瑞氏吉姆萨染色显示ATO、AMN107单用组细胞形态发生明显变化,细胞体积缩小,大小不均,核浆比例减小,细胞趋向早、中期成熟阶段分化；联用组不仅表现出早期红系分化细胞,还可以观察到小部分细胞向粒系分化。联苯胺染色及流式细胞术结果表明单药及联用组均可诱导K562细胞向红系分化,ATO组没有AMN107组效果明显,且两药联用对细胞向巨核系及粒系分化有较强协同作用,Western-blot、PCR结果提示,与对照组相比,单用组及联用组TAL1、BTG1蛋白及mRNA表达量均有所上调。实验结论ATO及AMN107对K562细胞有明显增长抑制作用,两者具有协同作用；ATO、AMN107均可单独诱导K562细胞红系分化,但ATO的诱导效应不如AMN107明显,对巨核系及粒系分化效果不明显；两药联用时红系分化效应较AMN107单独作用略微减弱,但对巨核系及粒系有较强的协同效应。