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目的:通过对照实验研究,观察柴黄清胰活血颗粒对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)模型大鼠的血清学相关指标、胰腺组织病理学评分、胰腺腺泡细胞凋亡指数的影响,探讨该药对SAP模型大鼠的治疗效果及其对胰腺组织腺泡细胞凋亡的影响;同时检测胰腺组织凋亡相关蛋白cleaved Caspase-3、Survivin的表达,进一步研究其可能的调控机制,为柴黄清胰活血颗粒的新药开发及更广泛的临床运用提供实验及理论依据。方法:随机将48只SD大鼠分为三组,分别为假手术组(Sham组),重症急性胰腺炎模型组(SAP组),柴黄清胰活血颗粒治疗组(CHQY组),每组16只。SAP组及CHQY组大鼠采用经十二指肠逆行胰胆管注射3.5%牛磺胆酸钠(按0.1ml/100g计算)建立SAP模型,Sham组大鼠无需注射牛磺胆酸钠,剖腹后仅翻动腹腔脏器数次后关腹。麻醉苏醒后,CHQY组每4小时予以柴黄清胰活血颗粒(按0.2g/100g计算,稀释为1ml/0.2g)灌胃1次,Sham组及SAP组每4小时予以生理盐水(按1ml/100g计算)灌胃1次。三组大鼠分别于术后12h、24h分批处死,每个时点各8只,取腹主动脉血5ml,离心后取血清检测血清淀粉酶(amylase,AMY)及血清脂肪酶(lipase,LIP)水平。完整的取下大鼠的胰腺组织,部分胰腺组织固定于4%多聚甲醛,24小时后行石蜡包埋、切片及HE染色,并进行病理学评分;部分胰腺组织制作石蜡切片,运用原位末端转移酶标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测胰腺腺泡细胞凋亡情况,并运用公式计算凋亡指数(Apoptosis Index,AI);剩余胰腺组织运用Western Blot检测cleaved Caspase-3、Survivin蛋白在胰腺组织中的表达情况。统计方法:运用统计学软件SPSS 25.0进行统计分析,计量资料以均数±标准差(?x±s)表示,数据呈正态分布且方差齐时,多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),进一步两两比较采用LSD法,组内两两比较采用t检验;数据呈非正态分布或方差不齐时,釆用非参数秩和检验,P<0.05表示差异有统计学意义。结果:(1)剖腹后大体观察:Sham组各时点大鼠腹腔无明显积液,各器官基本正常;SAP组各时点大鼠腹腔大量红黄色积液,胰腺肿胀、充血、坏死,肠管肿胀充血,胰腺、邻近组织及网膜可见大量黄白色皂化斑,腹腔脏器严重粘连;CHQY组各时点腹腔积液量少于SAP组,脏器损害及器官粘连程度均较SAP组轻。(2)胰腺组织病理学各项目评分及总评分比较:SAP组与CHQY组各时点水肿、出血、坏死、炎症、空泡五个项目评分均高于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05);SAP组组内两时点病理学总评分比较,24h病理学总评分显著高于12h(t=4.583,P<0.001);CHQY组12h水肿、坏死、空泡评分明显低于SAP组12h评分(Z=-2.128,P=0.033;Z=-2.199,P=0.028;Z=-2.199,P=0.028),炎症、出血两项目评分比较差异无统计学意义(Z=-0.447,P=0.655;Z=-0.810,P=0.418);CHQY组24h水肿、炎症、出血评分明显低于SAP组24h评分(Z=-2.640,P=0.008;Z=-2.513,P=0.012;Z=-3.019,P=0.003),坏死、空泡两项目评分比较差异无统计学意义(Z=-1.264,P=0.206;Z=-1.073,P=0.283);CHQY组12h、24h病理学总评分均明显低于SAP组对应时点(t=4.640,P<0.001;t=9.031,P<0.001)。(3)血清淀粉酶水平比较:SAP组与CHQY组12h、24h血清淀粉酶水平均明显高于Sh am组,有统计学差异(P<0.05);CHQY组12h血清淀粉酶水平与SAP组12h比较差异无统计学意义(Z=-1.575,P=0.115);CHQY组24h血清淀粉酶水平明显低于SAP组24h(Z=-2.521,P=0.012)。(4)血清脂肪酶水平比较:SAP组与CHQY组12h、24h血清脂肪酶水平均高于Sham组,且差异显著(P<0.05);CHQY组12h血清脂肪酶水平与SAP组12h比较无明显差异(Z=-1.680,P=0.093);CHQY组24h血清脂肪酶水平低于SAP组24h,有统计学差异(Z=-3.151,P=0.002)。(5)胰腺腺泡细胞凋亡指数比较:SA P组及CHQY组12h、24h腺泡细胞凋亡指数均高于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05);SAP组组内比较,24h腺泡细胞凋亡指数较12h明显下降(t=3.388,P=0.004);CHQY组12h、24h腺泡细胞凋亡指数均高于SAP组对应时点,且差异显著(t=11.795,P<0.001;t=10.209,P<0.001)。(6)胰腺组织cleaved Caspase-3蛋白表达比较:cleaved Caspase-3蛋白在Sham组各时点胰腺组织中均呈低表达,SAP组及CHQY组各时点cleaved Caspas e-3蛋白表达水平明显高于Sham组且有统计学意义(P<0.05);SAP组组内比较,24h cleaved Caspase-3蛋白表达水平较12h明显降低(t=2.209,P=0.044);CHQY组cleaved Caspase-3蛋白表达水平在12h、24h均高于S AP组对应时点,且差异显著(t=3.826,P=0.001;t=3.981,P=0.001)。(7)胰腺组织Survivin蛋白表达比较:Survivin蛋白在Sham组各时点胰腺组织中均呈低表达,SAP组及CHQY组各时点胰腺组织Survivin蛋白表达水平明显高于Sham组对应时点,差异有统计学意义(P<0.05);SAP组组内比较,24h胰腺组织Survivin蛋白表达水平较12h明显升高(t=2.665,P=0.018);C HQY组胰腺组织Survivin蛋白表达水平在12h、24h均低于SAP组对应时点,且差异显著(t=4.671,P=0.001;t=4.740,P=0.001)。结论:(1)SAP模型大鼠的病情轻重与胰腺腺泡细胞的凋亡程度呈负相关。(2)柴黄清胰活血颗粒能增加SAP模型大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的发生,减轻其胰腺组织的病理损伤及炎症反应,即柴黄清胰活血颗粒对SAP模型大鼠的治疗作用,可以通过诱导其胰腺腺泡细胞凋亡实现。(3)胰腺组织cleaved Caspase-3蛋白表达水平与胰腺腺泡细胞凋亡程度呈正相关,Survivin蛋白表达水平与胰腺腺泡细胞凋亡程度呈负相关;柴黄清胰活血颗粒诱导SAP模型大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的机制,可能与上调胰腺组织cleaved Caspase-3蛋白的表达和抑制Survivin蛋白的表达有关。