缺氧诱导因子-1α在大鼠血栓闭塞性脉管炎模型中的表达

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目的:1.建立血栓闭塞性脉管炎的动物模型2.建立动物血清中和肌肉组织中缺氧诱导因子- 1α的表达的检测方法3.研究动物血栓闭塞性脉管炎模型血清和肌肉组织中缺氧诱导因子- 1α的表达规律,为血栓闭塞性脉管炎病因和发病机制的研究提供实验依据,从而为本病的治疗方法和预后检测提供新的思路。方法:1.Wistar大鼠35只随机分为假手术组,1天,3天,1周,2周,3周,4周造模组,每组5只,术前均留取血清标本,通过向大鼠股动脉注射月桂酸钠,制造大鼠血栓闭塞性脉管炎模型,按照造模时间分批处死,假手术组于4周时处死,处死前留取术后血清标本,并取左右后肢造模处周围肌肉组织。2.ELISA法检测造模前后血清中HIF- 1α水平,免疫组化法半定量检测造模后健侧与患侧肌肉组织中HIF- 1α的表达。3.统计学方法:结果均用(?)±S表示,统计学方法采用方差分析,两两比较采用LSD法,所有结果均由SPSS13.0软件处理得出。结果:1.体征变化:各造模组大鼠均出现左后肢缺血表现,依造模时间增加而逐渐加重,1天组、3天组均有左后肢缺血、肿胀、足趾发黑表现、1周组缺血表现加重、坏死范围扩大至踝部。2周组出现干性坏疽、坏死范围至膝部,局部炎症反应明显,3周、4周组有坏死肢体脱落表现严重者有肢体干性坏疽甚至肢体脱落。组织病理切片示:炎症反应明显,炎症细胞聚集,肌肉组织失去正常纹理结构,2、3、4周组股动脉内可见节段性闭塞,广泛血管内血栓形成,并伴有大量新生毛细血管。大鼠体征变化及病理切片结果证实,大鼠血栓闭塞性脉管炎模型建立成功。2.血清检测结果:所有造模组大鼠术后血清HIF- 1α表达均高于术前,造模1天、3天组、1周组、2周组、3周组、4周组、术后血清HIF- 1α表达水平分别与各组术前比较差异均有统计学意义(P<0.05),假手术组造模前后HIF- 1α血清表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05),各造模组术后血清HIF- 1α表达在1天组迅速升高,3天时略降低,后逐渐下降,但均高于假手术组水平,其中1天与3天之间、1周与2周之间、3周与4周之间比较差异无统计学意义(P>0.05),其余造模组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3.免疫组化结果:HIF- 1α蛋白在假手术组双侧及造模组健侧肌肉中低表达,造模组患侧肌肉组织中高表达,各造模组患侧HIF- 1α蛋白表达的平均灰度值较健侧比较差异均有统计学意义(P<0.05),其中1天、3天组平均灰度值最低,两组间比较差异无统计学意义(P>0.05),较其他造模组比较差异有统计学意义(P<0.05),1周、2周组表达水平组间比较差异无统计学意义(P>0.05),较其他造模组差异有统计学意义(P<0.05),3周、4周组组间比较差异无统计学意义(P>0.05),较其他造模组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:1.采用股动脉注射月桂酸钠法制作TAO大鼠模型,方法简便,造模成功率高,可用于TAO的科学研究。2.本实验初步研究得出在血栓闭塞性脉管炎病变早期,血清和组织中缺氧诱导因子-1α均呈高表达,随着病变进展均逐渐下降,这可能是TAO患者未能建立有效侧枝循环进而使病情加重的直接原因。
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