【摘 要】
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本研究以新疆杨(Populus alba L.var. pyramidalis.)为材料,在建立无菌快繁体系的基础上,利用组培苗茎段诱导愈伤组织,进而就不同起始材料原生质体分离、纯化技术进行了探讨,
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本研究以新疆杨(Populus alba L.var. pyramidalis.)为材料,在建立无菌快繁体系的基础上,利用组培苗茎段诱导愈伤组织,进而就不同起始材料原生质体分离、纯化技术进行了探讨,并初步开展了原生质体培养和体细胞染色体加倍技术的研究。主要结果如下：1.在建立新疆杨无菌苗组培快繁体系的基础上,开展了愈伤组织培养研究,发现以新疆杨同一无菌苗植株不同部位为材料,其愈伤组织诱导率均为100%；愈伤组织诱导的适宜培养基为1/2MS+2,4-D 3.0mg/L；经过2-4次继代的愈伤组织由色泽浅黄而鲜艳的小颗粒组成,生长速度较快。2.以新疆杨组培苗叶片、愈伤组织为材料,进行了原生质体游离、纯化技术研究,结果表明,新疆杨不同起始材料的原生质体游离最适酶液组合不同,叶片采用1.0%Cellulase R-10+0.5%Macerozyme R-10+1.0%Hemicellulase+1.0% Pectolase Y-23;愈伤组织采用2.0%Cellulase R-10+1.0%Macerozyme R-10+ 1.0%Pectolase Y-23。在添加600mg/L MES.1g/L牛血清蛋白、pH值5.8的条件下酶解8h,可获得较高产量和活力的原生质体。起始材料和取材时间对新疆杨原生质体产量和活力有显著影响,其中采用继代30d的无菌苗第2-4片叶片的原生质体产量最高,达到1.5×107个/g·FW,活力为81.6%；采用继代2-4次后生长20d左右的愈伤组织材料能获得8.50×106个/g·FW的产量,活力达81.2%；新疆杨原生质体纯化以上浮法蔗糖等密度离心最好,纯净原生质体产量为2.20x106个/g·FW,活力保持在83.6%。3.初步开展了新疆杨原生质体培养研究,试验了不同基本培养基、不同激素配比、不同培养方法等对新疆杨原生质体培养的影响,发现在2.5×105/ml培养密度下,采用KM8p+ 2,4-D 3.0mg/L+ZT 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+NAA0.5 mg/L+MES 600mg/L+牛血清蛋白1g/L+CH 500mg/L+谷氨酰胺200 mg/L+天门冬氨酸150mg/L+0.6mol/L葡萄糖等培养基培养有细胞分裂启动迹象,但未获得愈伤组织和再生植株。4.对叶片不定芽进行了染色体加倍研究,在筛选出1/2MS+BA 0.25mg/L +IAA0.25mg/L+TDZ 0.01 mg/L为叶片不定芽诱导最佳培养基的基础上,采用秋水仙碱溶液处理离体叶片并诱导不定芽分化,在预培养8d后,用500mg/L秋水仙碱溶液处理12h的组合观察到一定数量的形态变异植株,并利用形态学观察后对疑似植株进行了流式细胞仪鉴定,未发现多倍体。
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