【摘 要】
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丝胶(Silk sericin,SS)是桑蚕丝中包裹丝素组分的外层蛋白,属于桑蚕丝脱胶加工的副产物,具有较高的反应活性、良好的低免疫原性和生物相容性。另一方面,由于丝胶水溶性较高,
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丝胶(Silk sericin,SS)是桑蚕丝中包裹丝素组分的外层蛋白,属于桑蚕丝脱胶加工的副产物,具有较高的反应活性、良好的低免疫原性和生物相容性。另一方面,由于丝胶水溶性较高,以其为原料加工的再生蛋白膜材料的成型稳定性不理想,表现为水相条件下溶失率较高,不同程度上限制了其在生物材料领域的应用。本文采用谷氨酰胺转氨酶(TGase)催化酰胺基转移反应,实现丝胶大分子间交联,旨在通过提升丝胶蛋白的分子量,改善丝胶基材料的结构稳定性;在此基础上,分别选取壳寡糖(Chitosan oligosaccharides,COS)和壳聚糖(Chitosan,CS),考察TGase催化氨基多糖与丝胶蛋白的接枝和桥接交联效果,在降低丝胶蛋白材料水溶性的同时,赋予丝胶基再生材料一定的功能性,制备抗菌和抗氧化丝胶基复合膜材料。首先选用含谷氨酰胺(Q)和赖氨酸(K)的定制肽(GQGEGQG,p-Q;KKKK,p-K),探究多肽对TGase催化丝胶分子间发生酰基转移反应的影响;借助SDS-PAGE、SEC色谱评价蛋白体系分子量变化;结合酶促反应体系释氨量、游离氨基含量测定,评价TGase酶催化丝胶交联效果。结果表明,TGase与多肽p-Q组合处理后,丝胶蛋白分子量明显增加,酶催化处理对丝胶的构象结构有明显的影响;相反,含赖氨酸的多肽p-K对于TGase催化的丝胶蛋白分子交联无促进作用;TGsae/p-Q处理制备的丝胶膜较未处理样和仅TGase处理样的成型稳定性和力学性能有明显改善。在酶促丝胶自交联基础上,探究了TGase催化丝胶与COS和CS接枝的可行性;考察了TGase酶促COS和CS与丝胶蛋白分子的接枝与交联效果,并制备二种丝胶基复合膜材料(SS/COS/TGase、SS/CS/TGase等),对比评价了膜材料在热水溶失率、力学性能、抗菌和抗氧化性能上的变化。结果表明,TGase能催化丝胶与氨基多糖发生接枝,酶促反应中同时存在丝胶蛋白分子间自交联、丝胶接枝氨基多糖分子两种竞争性反应;TGase酶催化丝胶和氨基多糖接枝反应后,制备的复合膜材料水溶性降低,成型形态结构稳定性有改善;水中浸渍处理后,接枝样表现出稍高的抗菌和抗氧化效果;不同脱胶方法相比,以高温高压法脱胶为原料制备的丝胶基复合膜(丝胶:壳聚糖用量比4:1)表现出较好的应用性能。既有酶法改性方法为实现丝胶蛋白的资源化再利用、制备丝胶基生物材料提供了新思路。
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