论文部分内容阅读
目的:通过恶性黑色素瘤小鼠移植瘤模型给药实验,从病理形态学和分子水平研究多西环素对恶性黑色素瘤微循环模式和增殖活性的影响,初步阐明该药对恶性黑色素瘤的作用及其机制,进而为探索恶性黑色素瘤治疗新途径提供实验依据。 方法:C57小鼠47只,随机分为给药组和对照组,鼠鼷部注射黑色素瘤B16细胞悬液建立荷瘤小鼠模型。待小鼠出现可触及肿块后开始给药,给药组每日腹腔注射盐酸多西环素,对照组给予等量生理盐水。连续给药7天后处死给药组和对照组小鼠各10只。继续给药实验14天后处死剩余小鼠,剥离瘤块并称重,取少量无坏死的新鲜肿瘤组织-80℃冻存。将剩余肿瘤组织沿最大面剖开,常规固定并进行HE和PAS染色,进行形态学观察。免疫组化染色观察药物对MMP-2、MMP-9、VEGF、PCNA表达的影响。计数方法如下:避开坏死组织,选择有代表性的10个高倍视野,每个视野计数100个肿瘤细胞,使用阳性细胞指数来评价整张切片的染色状况。从冻存的新鲜肿瘤组织提取总蛋白,用明胶酶谱法检测给药组和对照组肿瘤组织在两个时间点中MMP-9、MMP-2酶原(pro-MMP-2)、活性MMP-2(actived-MMP-2)的活性变化,以观察该药对MMP-2、MMP-9活性的影响。肿瘤微循环模式计数方法如下:随机选择10个高倍视野,结合PAS染色进行内皮依赖性血管、VM计数并取均值,观察多西环素对肿瘤微循环的影响。使用统计学软件包SPSS进行析因设计的方差分析比较各组间均数差异,以P<0.05为有统计学意义标准。 结果:多西环素给药组小鼠肿瘤生长速度始终低于对照组,初期抑瘤效果比较显著,但后期抑瘤作用有所降低,给药7天抑瘤率为52.36%,给药14天抑瘤率降为35.63%。明胶酶谱法分析显示,给药组的MMP-9和活性MMP-2的条带酶解量以及活性MMP-2与MMP-2酶原比值均低于对照组(P<0.01),但两组间