实时定量PCR监测多发性骨髓瘤患者反应停治疗和干细胞移植后微小残留病

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研究背景:微小残留病(minimal residual disease,MRD)是大部分多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者治疗后复发的主要原因。MRD的检测对于患者疗效和复发及预后的判断有重要意义,目前国际上把IgH(immunoglobulin heavy chain,IgH)基因重排作为检测B细胞系肿瘤MRD最常用的克隆标记物。过去定量研究IgH基因重排的方法多用终点定量PCR产物和极限稀释法等,但这些检测方法是半定量的方法,检查结果往往不能准确反映MRD存在。随着分子生物学技术发展,现在常用的实时定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction)方法有杂交探针法、TaqMan探针法、分子信标(molecular beacon)等方法,都可以用来分析MRD,每种方法各有优缺点。但因为IgH基因重排在MM中非常复杂,这些方法都需要合成患者特异性引物和荧光探针,大大增加了实验成本,不适合临床的大样本检测。本实验拟探讨利用SYBR Green荧光染料,使用IgH基因重排通用引物,以IgH基因重排为标志,采用实时定量PCR方法,探讨反应停治疗和大剂量化疗联合自体外周造血干细胞移植(autologous peripheral blood stem cell transplantation,APBSCT)前后MRD的变化,并以此来判断患者的疗效和患者的预后。 目的:探讨应用实时定量PCR方法检测MM患者在应用反应停治疗和大剂量化疗联合APBSCT前后的IgH基因重排,探讨治疗前后患者MRD的变化及其与治疗疗效和预后的关系。 方法:利用SYBR Green Ⅰ荧光染料和IgH基因重排通用引物,祭—军民大学方颀十学世俗文 中文份要采用实时定量PCR方法,对26例反应停治疗和 9例大剂量化疗联合APBSCT前后的MM患者的哈H基因重排进行定量分析。 结果:IgH基因重排拷贝数,在反应停治疗完全缓解组和有效组前后分别为 3028士655.59,43.4土24.85和 7467土6if*5,619土271.2,前后相比两者差异有显著性(P1刀5人 无效组6153到2又对2,6575到227.13,前后差异无显著性 o>0对引,与患者骨髓浆细胞比例成正相关(r=0.89,p<0.05)。lgH基因重排拷贝数在APBSCT前后分别为3I08士347*8,594土220*7,两者差异有显著性(P<0*5),与患者骨髓浆细胞比例成正相关卜对.86,P功力5),并对一例复发患者进行连续检测,结果与临床表现和实验室检查相符。 结论:本实验表明,利用 SYBR Green荧光染料和 IgH基因重排通用引物的实时定量PCR对哈H基因重排的定量分析,可以监测MM患者体内MRD;作为判断MM治疗疗效的一种检测方法,对患者的预后判断有指导意义。
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