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研究背景： 当前在全世界范围内，乳腺癌已经成为女性最常见且死亡率最高的癌症。在我国，由于经济发展，人民生活习惯的不断西化，人口的老龄化也越来越明显，种种的原因导致了乳腺的发病率和死亡率正在迅速攀升。目前手术仍是乳腺癌的首选治疗方式，且手术方式也在不断的改进。但是现在越来越多的学者达成共识，认为乳腺癌并不只是单纯一个组织的病变而是一种全身的系统性疾病，其发生发展涉及到很长的一个生命过程。于是，现在普遍认为乳腺癌的治疗需要多种治疗手段相配合，各科室间相互合作，既要保证规范化同时还要达到个体化。化疗在乳腺癌的综合治疗中发挥着不可替代的作用，其中紫杉类药物是目前最常用的化疗药物。但是就像大多数抗肿瘤药一样，耐药性的产生是影响其临床疗效的巨大障碍。因此，对化疗药物耐药机制的研究是非常重要的。术前预测患者对特定药物的化疗敏感性或逆转其耐药性将会是未来提高恶性肿瘤治疗效果的重关键突破点。近年来，随着microRNA（miRNA）研究的不断深化，关于miRNA参与调控肿瘤细胞各种生命进程的证据越来越多。在一些最新的研究中，学者发现miRNA与肿瘤细胞耐药性的改变高度相关。本研究通过高通量测序技术筛选出在紫杉醇耐药患者和敏感患者之间差异表达的miRNA，并以miR-126为最终研究对象，使用实时荧光定量PCR在组织水平进行验证，采用外源RNA干扰技术调节miR-126在乳腺癌细胞中的表达水平，观察并分析其表达量的改变对乳腺癌紫杉醇化疗耐药的影响及其可能作用机制。 目的： 探讨微小RNA-126(miR-126)对乳腺癌紫杉醇化疗耐药性产生的作用及潜在机制。 方法： 采用高通量分析技术筛选出在乳腺癌紫杉醇耐药组织和敏感组织中差异表达的miRNA，实时荧光定量PCR技术(Real-time PCR)进行验证。经通过RNA干扰技术人为调整miR-126在MCF-7及紫杉醇耐药的MCF-7/TAX细胞中的表达水平，CCK8检测干扰前后肿瘤细胞在不同浓度紫杉醇作用下的存活率，计算出半数抑制浓度(IC50)，用在线预测软件预测miR-126潜在的靶基因，免疫印迹法检测转染前后细胞内Snai2蛋白的表达水平。 结果： 1、高通量测序分析并筛选出了紫杉醇耐药组织和敏感组织间差异性表达的miRNA，选择miR-126为最终研究对象。 2、荧光定量PCR检测发现miR-126在耐药组患者癌组织中的相对表达量为0.04±0.01，在敏感组为1.08±0.41，差异有显著统计学意义(P＜0.001)。 3、荧光定量PCR检测发现miR-126在常规培养的MCF-7/TAX细胞株中的表达水平较MCF-7细胞有明显的下降(P＜0.001)。 4、以Lipo2000为载体，用miR-126 mimics、miR-126 inhibitor及相应的阴性对照(negative control，NC)分别转染MCF-7/TAX细胞和MCF-7细胞后予不同浓度紫衫处理。CCK-8法检测结果发现经miR-126 mimics转染的MCF-7/TAXOL细胞较阴性对照组的敏感性明显增强，而对于转染miR-126 inhibitor的MCF-7细胞来说，其紫杉醇敏感性较相应的阴性对照组有明显降低。根据以上结果计算出各组对紫杉醇的IC50，可以发现MCF-7/TAX mimics组的IC50明显低于相应对照组:(4.68±0.32ug/ml) vs(14.95±0.43ug/ml),P＜0.01;而MCF-7 inhibitor组的IC50则较相应对照组大幅升高:(12.18±0.81 ug/ml) vs(2.15±0.35 ug/ml)，P＜0.01。 5、通过RNAhybrid、PITA、miRanda、PicTar及RNAfold预测软件筛选出24个miR-126的潜在靶基因。 6、免疫印迹检测结过显示MCF-7细胞在转染miR-126 inhibitor后，Snai2蛋白的表达水平较阴性对照组明显升高，两者的相对表达量分别为:0.70±0.02和0.40±0.01,P＜0.01;另一方面，用miR-126 mimics或阴性对照转染MCF-7/TAXOL细胞72小时后，检测到Snai2蛋白的相对表达量分别为0.09±0.02和0.63±0.01，P＜0.01。 结论： 1、miR-126的表达水平和乳腺癌对紫杉醇化疗的敏感性密切相关。降低miR-126在MCF-7细胞中的表达水平可使其获得一定的耐药性，而提高miR-126在MCF-7/TAX细胞中的表达水平可以逆转耐药。 2、miR-126对乳腺癌紫杉醇敏感性的影响可能是通过调控细胞内Snai2的表达水平来实现的。