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植物与病原微生物在漫长的共进化过程中逐步形成了先天免疫系统,该系统包括两个方面,一是基于细胞表面的模式识别受体PRRs对病原物相关分子模式PAMPs的识别,这个过程被称作病原物相关分子模式触发的免疫反应(PTI);第二种免疫来自于细胞内部,主要依靠植物本身的抗病基因编码产生的的蛋白或者小分子物质起作用,这一过程被称为效应因子触发的免疫反应(ETI)。为发现PTI和ETI中变化并起关键作用的蛋白,本项研究选用水稻(栽培品种日本晴),使用亲和性稻瘟菌Guyl1和非亲和互作菌株2539对水稻叶片进行侵染试验,提取24h、96h和未侵染植株叶片的总蛋白和质膜蛋白,使用iTRAQ标记技术进行LC-MS/MS定量检测。通过使用6.4%_Dextran T-500/PEG-3350聚合物的双水相体系,富集到了质膜且占总数的43.35%;在对蛋白进行定量分析后发现,质膜蛋白的4组数据中共有上调蛋白124个,下调蛋白41个;总蛋白的2组数据中共有上调蛋白173个,下调蛋白49个。在质膜蛋白和总蛋白中都显著上调的蛋白有21个,下调蛋白5个,其中被确定为质膜蛋白的有6个。接种24h后,在亲和菌株Guy11与非亲和菌株2539处理组之间均呈现差异表达的蛋白共有22个;接种96h后均呈现差异表达的蛋白共有33个。接种非亲和菌株后被诱导上调表达的蛋白在96h多于亲和菌株,且随着侵染的继续,被诱导产生的蛋白数量也随着增多.在四个处理中均显著上调的蛋白有6个。在对蛋白功能进行分析后的数据表明,一些蛋白具有与抗病相关的功能或活性如:丝氨酸/苏氨酸激酶活性、ATP/核苷酸结合作用、金属离子结合功能、转运功能、信号接收功能。这些具有一致性的蛋白中,很有可能存在着定位于质膜上,且能够在早期的防卫反应中识别病原物的PRRs。已发表的结果和本实验室未公布的数据显示OsAGO18在水稻对条纹叶枯病毒(RSV)和稻瘟菌的抗性中均起作用。当RSV侵染水稻后,它能减轻microRNA168对水稻抗性蛋白AGO1的干扰。为了加深对OsAGO18在对稻瘟病抗性中作用的研究,我们选取从N端开始636bp的特异性片段,设计了重组蛋白AGO18639,采用烟草瞬时表达后纯化出300μg抗原,将用于AGO18的多克隆抗体制备。得到的抗体将用于研究AGO18在抗病过程中的作用以及互作对象的鉴定。