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目的探讨siRNA靶向沉默Notch1基因对T细胞淋巴瘤细胞的增殖及凋亡作用的影响,以及对T细胞淋巴瘤细胞Notch1/c-Myc信号通路的影响。方法选取Jurkat细胞作为T细胞淋巴瘤模型,取对数生长期的细胞进行如下实验研究。提取DNA进行Notch1基因的外显子27、34进行测序,测定其突变位点,利用RNA干扰技术(RNAi)合成两段小干扰RNA序列(siRNAⅠ和siRNAⅡ)靶向沉默Notch1基因。在进行细胞转染72h之后,利用共聚焦显微镜观看转染的绿色荧光(慢病毒携带),然后用嘌呤霉素筛选成功转染的稳定的细胞株(慢病毒载体携带抗嘌呤霉素基因)。用筛选好的转染成功的Jurkat细胞进行该实验研究。每项试验至少重复三次。利用CCK-8法分析转染后的Jurkat细胞的活力;分别提取Jurkat细胞总RNA和总蛋白,进行实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)检测Notch1及其靶基因c-Myc和凋亡基因Caspase3 m RNA和蛋白相对表达水平;并利用流式细胞术检测siRNA靶向沉默Notch1基因对Jurkat细胞凋亡的影响。利用单因素方差分析对所有的数据进行统计学分析,P<0.05则认为具有明显差异。结果1.siRNA转染组Ⅰ细胞增殖能力下降(0.472±0.202),与细胞对照组和siRNA阴性对照组相比,均具有统计学显著差异(P=0.000,P=0.001);siRNA转染组Ⅱ增殖能力下降(0.468±0.063),与细胞对照组和siRNA阴性对照组相比,均具有统计学显著差异(P=0.000,P=0.001);2.siRNA转染组Ⅰ细胞凋亡明显增加(25.170±1.756),与细胞对照组和siRNA阴性对照组相比具有统计学差异(P=0.000,P=0.000),siRNA转染组Ⅱ细胞凋亡增加(7.300±0.600),与细胞对照组和siRNA阴性对照组相比具有统计学差异(P=0.002,P=0.002);siRNA转染组Ⅰ和siRNA转染组Ⅱ相比较具有统计学差异(P=0.000);3.siRNA转染组ⅠNotch1、c-Myc m RNA表达水平下降(0.090±0.000、0.267±0.012),与细胞对照组相比均具有统计学显著差异(P=0.000,P=0.000),与siRNA阴性对照组相比具有统计学显著差异(P=0.000,P=0.000),Caspase3 m RNA表达水平增加(2.490±0.713),与细胞对照组和siRNA阴性对照组相比具有统计学显著差异(P=0.004,P=0.005);siRNA转染组ⅡNotch1、c-Myc m RNA表达水平下降(0.233±0.006、0.327±0.045),与细胞对照组相比均具有统计学显著差异(P=0.000,P=0.000),与siRNA阴性对照组相比具有统计学显著差异(P=0.000,P=0.000),Caspase3 m RNA表达水平增加(2.217±0.204),与细胞对照组和siRNA阴性对照组相比具有统计学显著差异(P=0.011,P=0.014);4.siRNA转染组ⅠNotch1、c-Myc蛋白表达水平下降(0.713±0.065、0.718±0.125),与细胞对照组相比均具有统计学显著差异(P=0.000,P=0.014),与siRNA阴性对照组相比具有统计学显著差异(P=0.000,P=0.020),Caspase3蛋白表达水平增加(1.245±0.033),与细胞对照组和siRNA阴性对照组相比具有统计学显著差异(P=0.000,P=0.001);siRNA转染组ⅡNotch1、c-Myc蛋白表达水平下降(0.897±0.175、0.871±0.125),与细胞对照组相比均具有统计学显著差异(P=0.000,P=0.021),与siRNA阴性对照组相比具有统计学显著差异(P=0.000,P=0.030),Caspase3蛋白表达水平增加(1.149±0.096),与细胞对照组和siRNA阴性对照组相比具有统计学显著差异(P=0.001,P=0.001)。结论siRNA靶向沉默Notch1基因可以显著抑制Notch1/c-Myc信号通路的传导,抑制Jurkat细胞生长,提高凋亡率。