氨基酸类神经递质（AANTs）在动物体内经过一系列的合成、转化与消逝等过程,同生物胺类、肽类和其他类的神经递质相互作用,共同维持着动物体内兴奋性的动态平衡。鉴于这些神经递质在机体内的含量变化会影响其在生物基质中的相对平衡,而这种相对平衡又决定着神经元的兴奋性水平,可见测定神经递质的含量变化与脑部生理功能和病理变化息息相关,因此,有必要建立神经递质检测方法分析生物样品中的含量。目前,常用内源性AANTs主要包括谷氨酸（Glu）、天冬氨酸（Asp）、甘氨酸（Gly）、牛磺酸（Tau）和γ-氨基丁酸（GABA）,且大多采用高效液相色谱（HPLC）耦合荧光、质谱、紫外检测系统,其次是毛细管电泳（CE）和气相色谱（GC）等分析方法,各有优缺点。因此,本论文使用二维液相色谱（2D-LC）建立一个同时检测5种内源性AANTs的方法,为临床应用与各种生物样品中氨基酸（AA）含量测定建立基础。本试验首次开展了2D-LC-UV系统同时测定动物血液和脑组织中Asp、Glu、Gly、Tau和GABA的方法研究。样品采集后先经有机沉淀、离心,再用4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧杂恶二唑（4-fluoro-7-nitrobenzofurazan;NBD-F）将AANTs标记在相应的荧光衍生物上。设计了100μL AANTs/样品上清液、350μL四硼酸钾缓冲溶液（10 mmol/L）和50μL NBD-F（10 mmol/L）工作溶液的衍生体系进行衍生反应。通过大体积进样使反应产物在萃取柱（一维色谱柱:SNCB 50 mm*4.6 mm*5μm柱）上进行初次分离、部分除杂和目标富集,并自动转入分析柱（二维色谱柱:SBR3 200 mm*4.6 mm*5μm柱）实现目标成分的在线提取和完全分离。流经分析柱的水相是0.02 mol/L磷酸二氢钠和磷酸氢二钠缓冲液（p H=6.8～6.9）,有机相是甲醇-乙腈（3:1,v/v）;流经萃取柱的流动相是甲醇和0.02 mol/L磷酸二氢钠和磷酸氢二钠缓冲溶液（p H=6.8～6.9）（15:85,v/v）。在上述条件下进行方法学验证和含量测定之后,通过灌胃给药方式设计急性毒性试验,对大鼠进行单次给药,使用2D-LC-UV方法研究了钩吻素己对AANTs的药物影响。结果显示,该方法表现出良好的选择性,分析物校准曲线的相关系数＞0.99。日内、日间的精密度≤16.03,日内、日间准确度在70.59～116.20%之间,实现了5种AANTs的快速检测和稳定性定量,证明了替代稀释法的可行性。此外,建立的方法已成功应用于大鼠血清和猪血浆、大鼠和猪的全脑及脑分区（海马、皮层、纹状体、小脑、脑干和下丘脑）等生物样品的分析。表明大鼠与猪脑分区之间存在一定的部位差异和种属差异,钩吻素己对AANTs的含量变化与雌雄差异和分布部位有关,指向脊髓可能与钩吻素己的毒性机制具有相关性。该方法负载能力强,分辨率高,峰形好,且不受其他内源性物质的影响。有望为神经科学的药理学、药学和临床研究中AANTs的测定提供适用性,同时也为钩吻在神经药物的研究提供方法学研究。