傣药龙血竭是一味传统药物,兼有活血化瘀和收敛止血之功效,并且具有明显的镇痛和抗炎作用,在临床上应用极为广泛,近几年来,本实验小组对龙血竭的镇痛机理做了较多的研究,通过膜片钳技术在大鼠初级感觉神经元(包括DRG和TG神经元)上研究了龙血竭对TTX-S和TTX-R钠通道电流及辣椒素受体电流的影响。另外,还采用细胞外微电极记录技术,研究了龙血竭及其成分对大鼠脊髓背角广动力范围神经元诱发放电的影响,以上研究结果说明了龙血竭从不同水平、不同机制调制痛觉信息的中枢传入,从而达到镇痛效果。龙血竭对大鼠背根神经节细胞上钠通道的调制以及龙血竭抑制大鼠脊髓背角广动力范围神经元的诱发放电频率的结果表明,龙血竭能够通过中枢和外周对痛觉信息进行调制,但缺少对龙血竭镇痛活性类型的相关实验研究。之前的研究提出了龙血竭通过干预痛觉信息阻滞神经传导发挥其镇痛效应,而DRG细胞胞体轴突的一个分支与外周坐骨神经相连,若能对坐骨神经部分进行相应的研究,则龙血竭阻滞神经信息的传导就更具有说服力。因此,本文首先对小鼠进行一系列的药理实验,主要采用热板法、热辐射法和扭体法,来判定龙血竭的镇痛活性类型,通过实验发现,0.5g/L的龙血竭在热板法和光热辐射甩尾法实验中,能显著延长小鼠的舔足潜伏期和甩尾潜伏期;在小鼠扭体法实验中,则能显著减小15min内出现扭体反应的次数。实验结果表明,龙血竭既有良好的中枢镇痛活性,也具有良好的外周镇痛活性。其次,为验证龙血竭产生镇痛效应的药理机制,本文将制作牛蛙坐骨神经干标本,观察龙血竭对坐骨神经动作电位的影响。通过实验发现,0.5g/L的龙血竭使得牛蛙坐骨神经动作电位幅值降低,神经兴奋不应期延长和兴奋传导速度减慢,这些实验结果进一步确定了龙血竭阻滞神经传导的功能,也更进一步证实了龙血竭对痛觉信息传导的干预作用。另外,通过膜片钳实验研究已经发现,龙血竭及其主要成分龙血素B对与疼痛传递密切相关的钠通道和辣椒素受体均有调制作用,据已有文献报道,辣椒素能够调制电压门控钠通道,抑制钠电流,并且这种调制作用与辣椒素受体有关,由于龙血素B与辣椒素具有相似的化学结构,而龙血素B对钠通道电流也具有抑制作用,由此推测龙血素B对钠通道电流的影响也很可能与辣椒素受体有关。弄清上述问题将使所得研究结果更具有价值,根据以上分析,本文设计以下膜片钳实验对龙血竭及其成分龙血素B的镇痛机理进行深入研究。基于龙血素B在调制辣椒素受体和钠通道上与辣椒素的相似性。本文最后采用全细胞膜片钳技术,在DRG细胞上进行龙血素B调制钠通道与辣椒素受体的关系研究,并探讨龙血素B和辣椒素的相互作用关系。通过实验得到以下结果:1、龙血素B和辣椒素的组合对钠电流的抑制率比各自单独作用时要高;2、龙血素B和辣椒素共同作用时,当固定其中任何一种药物的浓度,而改变另一种药物的浓度时,激活曲线向去极化方向偏移的程度和加速钠通道失活的程度都会随着这种药物浓度的增大而减小;3、通过药物相互作用分析得出龙血素B和辣椒素调制钠通道时具有拮抗作用。以上结果也表明龙血素B对钠通道的调制作用确实与辣椒素受体有关,并且龙血素B和辣椒素的作用位点并非同一受体的同一位点,两者之间不存在竞争性的拮抗作用。本文的研究结果可作为龙血竭镇痛效应新机理的基础,并结合之前对龙血竭的镇痛研究结果,使得下一步我们能够对龙血竭进行深入的药理学研究,并开发新型镇痛类药物,也有利于对龙血竭进行二次开发,提高其科技含量,扩大社会效益和经济效益。