兽药及非法添加物可视化凝胶检测柱的研制

来源 :天津科技大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:akhiv
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本论文建立了喹诺酮类兽药、呋喃它酮代谢物AMOZ、氯霉素、三聚氰胺的免疫亲和凝胶柱分析方法,并应用于动物源性食品中上述药物残留的可视化快速检测。采用辛酸-硫酸铵法纯化诺氟沙星单克隆抗体,采用活化酯法制备酶标抗原(NOR-HRP),用溴化氰活化的琼脂糖凝胶分别与诺氟沙星单克隆抗体和HRP抗体偶联制备诺氟沙星抗体胶和HRP抗体胶。通过优化工作条件,确定酶标抗原、诺氟沙星抗体胶、HRP抗体胶的稀释比例分别为1:500000、1:7、1:12 (v/v),样品稀释液为pH 7.4的PBS缓冲溶液。在最优条件下免疫亲和凝胶检测柱分析方法的检测限为5 μg/L (以诺氟沙星计)。特异性实验结果显示,该检测柱与环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星等喹诺酮类药物存在不同程度的交叉反应,表明该检测柱可用来同时检测这些种类的喹诺酮类药物。动物源性食品中诺氟沙星的检测限为25~75 μg/kg (μg/L)。采用Protein A-Sepharose 4B免疫亲合层析法纯化呋喃它酮代谢物AMOZ多克隆抗体,采用活化酯法制备酶标抗原(CPAMOZ-HRP)。通过优化工作条件,确定酶标抗原、AMOZ抗体胶、HRP抗体胶的稀释比例分别为1:70000、1:39、1:39 (v/v),样品稀释液为pH 7.4的PBS缓冲溶液。在最优条件下呋喃它酮代谢物AMOZ免疫亲和凝胶检测柱分析方法的检测限为20 μg/L (以2-NPAMOZ计),动物源性食品中AMOZ的检测限为3~6μg/kg (μg/L)。采用如上方法纯化氯霉素多克隆抗体,采用活化酯法制备酶标抗原(CAP-HRP),通过优化工作条件,确定酶标抗原、氯霉素抗体胶、HRP抗体胶的稀释比例分别为1:100000、1:9、1:19 (v/v),样品稀释液为pH 8.5的PBST缓冲溶液。在最优条件下氯霉素免疫亲和凝胶检测柱分析方法的检测限为3 μg/L (以氯霉素计),动物源性食品中氯霉素的检测限为3~15μg/kg (μg/L)。采用如上方法三聚氰胺多克隆抗体,采用活化酯法合成酶标抗原(MEL-HRP),通过优化工作条件,确定酶标抗原、三聚氰胺抗体胶、HRP抗体胶的稀释比例分别为1:10000、1:4、1:149 (v/v),样品稀释液为pH 5.7的PBST缓冲溶液。在最优条件下三聚氰胺免疫亲和凝胶检测柱分析方法的检测限为200 μg/L (以三聚氰胺计)。乳制品中三聚氰胺的检测限为1000 μg/kg。
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