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替米考星(Tilmicosin,TIM)是一种由泰乐菌素(Tylosin,TYL)半合成制得的大环内酯类畜禽专用抗生素,与泰乐菌素具有相似的抗菌活性,对多杀巴斯德菌和胸膜肺炎放线杆菌的抗菌活性更强。目前广泛用于治疗畜禽呼吸道疾病,也用于饲料添加剂来促进动物生长。为保障动物源性食品安全,许多国家和地区都制定了替米考星的最高残留限量。基于动物源性食品基质的复杂性和替米考星残留检测的痕量性,需要建立一种高选择性的样品预处理方法来提高分析方法的灵敏度和准确性。固相萃取是一种常用的提高选择性和灵敏度的样品前处理方法,制备一种对替米考星具有高亲和性和选择性的固相萃取材料有重要意义。
本论文利用分子印迹技术,以泰乐菌素为虚拟模板分子,甲基丙烯酸为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,合成对替米考星具有高选择性的分子印迹聚合物。通过优化聚合物的制备条件及固相萃取条件,建立了实际样品中替米考星残留的检测方法。
聚合反应条件的不同可影响其合成的印迹聚合物的吸附和识别性能。本文考察了五种单体(4-乙烯毗啶、2.乙烯吡啶、丙烯酰胺、甲基丙烯酸酸和甲基丙烯酸-2-羟基乙酯)和4种致孔剂(二甲基甲酰胺、甲醇、丙酮和氯仿)对合成聚合物性能的影响。通过L9(34)正交试验和各因素的综合考虑,优化聚合配方为:1.0 mmol泰乐菌素,4.0mmol甲基丙烯酸,20.0 mmol乙二醇二甲基丙烯酸酯,6.0 mL氯仿,20.0 mg偶氮二异丁腈。
以制备的聚合物作为固相萃取吸附剂,粒径在38.5~75μm之间聚合物颗粒150mg装于体积为3mL带有滤板的空固相萃取柱中。优化活化、上样、淋洗和洗脱条件,得到优化的固相萃取条件为:3mL甲醇活化,1-10 mL乙酸乙酯、氯仿、乙腈、甲醇或水(pH9.0)溶液上样,5mL氯仿和3mL甲醇分别洗涤,5mL氨甲醇(95:5,V/V)洗脱。在此条件下,替米考星在分子印迹固相萃取柱上的回收率达到90%以上,而空白印迹固相萃取柱的回收率在40%以下。
建立了利用MISPE从饲料、牛奶、鸡蛋和肌肉样品中净化、富集替米考星的方法,并与C18和HLB固相萃取柱比较。实验结果表明,MISPE具有更高的回收率和更好的净化效果,所有样品的加标回收率均在75%以上,批间和批内变异系数均在15%以下。
本实验为检测替米考星残留提供了新型固相萃取吸附材料,并且所建立的检测方法简单、准确、重现性好,能满足残留检测要求。