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含血红素的蛋白质在生物体内具有重要的作用,同时,血红蛋白等血红素蛋白质是生物化学研究中的重要模型蛋白。本论文作者采用紫外一可见光谱和电化学手段,研究在可见光和紫外光照射条件下血红蛋白结构及功能的变化。
1.NADH存在条件下UVA照射对血红蛋白影响的研究本文选取血红蛋白作为对象蛋白质,研究在烟碱腺嘌呤二核苷酸(NADH)存在条件下,UVA(315-400nm)照射对蛋白质的结构和功能的影响。结果表明:在NADH存在条件下,UVA照射对血红蛋白的影响呈时间和浓度依赖关系。短时间的UVA照射高铁血红蛋白(metHb)和NADH的混合溶液使metHb被还原成亚铁血红蛋白,表现为蛋白质Q带575nm的光吸收增强:而长时间的UVA照射会严重破坏metHb的结构,表现为蛋白质Soret带和Q带的光吸收持续下降。需要提及的是,在NADH不存在的情况下,其他实验条件相同,metHb既不会被还原,蛋白质结构也不会被破坏。另一方面,从对蛋白质功能的影响方面来看,在NADH存在的条件下,短时间的UVA照射使血红蛋白的携氧能力提高,这与结构上metHb被还原是一致的;而长时间的UVA照射则使血红蛋白的携氧能力下降,这与metHb结构被破坏相一致。提高NADH的浓度,蛋白质被还原和结构被破坏的进程会加剧。
2.金丝桃素对血红蛋白催化活性的光动力学研究本文采用电化学手段辅之以紫外光谱的方法研究了光激活的金丝桃素对血红蛋白结构及其催化活性的影响。研究发现,金丝桃素在可见光条件下可以有效的产生活性氧自由基,从而引起血红蛋白的结构,特别是血红素及其周围环境的改变,进而提高了血红蛋白对过氧化氢催化的敏感性。同时,金丝桃素的浓度和光照射时间都是影响这一光动力学反应的重要因素,高浓度的金丝桃素和较长时间的光处理都会有效提高血红蛋白催化的敏感性。此外,研究表明,蛋白质的结构和催化活性的改变和活性自由基的产生量相关,较高的浓度和较长的时间都可以增加活性自由基的产生量,从而更有效的使血红蛋白的结构发生变化。同时,氧气是光动力学反应中不可或缺的重要因素,只有在氧参与的条件下才可以有效的激发自由基的产生。