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口腔黏膜鳞癌(oralsquamouscellcarcinoma,OSCC，简称口腔癌)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤，局部复发和颈淋巴结转移是其致死的主要原因。近年来，上皮间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)在恶性肿瘤侵袭转移过程中可能发挥关键作用受到广泛关注。研究发现Snail通过抑制E-cadherin表达在EMT过程中起核心调控作用，是其关键调节因子。目的：本研究通过构建pEGFP-N1-Snail真核表达质粒，检测过表达Snail的口腔癌细胞SCC9的生物学特性变化，探讨Snail在口腔癌细胞EMT及侵袭转移过程中的作用；在此基础上进一步验证过表达Snail的口腔癌细胞是否获得肿瘤干细胞(cancerstemcell,CSC)样特性。方法：成功构建pEGFP-N1-Snail真核表达质粒。分别抽提pEGFP-N1及pEGFP-N1-Snail质粒，用脂质体2000(Lipofectamine2000)转染SCC9肿瘤上皮细胞，通过G418筛选，获得稳定表达细胞株SCC9-N（对照组）及SCC9-S（实验组）。通过实时定量(QuantitativeReal-TimePCR,qPCR)，免疫蛋白印迹技术(WesternBlotting)，免疫荧光显微方法(ImmunofluorescenceMicroscopy)检测对照组和实验组细胞中E-钙粘蛋白(E-cadherin)，-连环蛋白(-catenin)，Snail，波形蛋白(vimentin)相关基因和蛋白的表达水平。应用划痕实验(Wound-HealingAssay)，侵袭实验(InvasionAssay)，粘附实验(AdhesionAssay)检测细胞侵袭和转移能力。另外，通过细胞流式技术(FlowCytometry)及单克隆形成实验(Colony-FormingAssay)检测转染后的肿瘤细胞获得了干细胞样特点。结果：成功构建了pEGFP-N1-Snail真核表达质粒，将pEGFP-N1及pEGFP-N1-Snail分别转染SCC9肿瘤上皮细胞,获得稳定表达细胞株SCC9-N（对照组）及SCC9-S（实验组）。过表达Snail诱导SCC9细胞发生了EMT，细胞形态从上皮样向成纤维样改变，典型的铺路石状向长梭形转变，细胞间变得松散，粘附能力减弱。上皮标记物E-cadherin和-catenin表达下降，而间质标记物vimentin表达上升，细胞侵袭和转移能力增强。更重要的是，Snail不仅诱导SCC9细胞发生了EMT，同时使这些间质细胞具有了CSC样特点，虽然细胞的侵袭能力增强，但是增殖能力却是减弱了，细胞不能向划痕处迁移，处于S期的细胞比例减少，形成的克隆较对照组减少，但SCC9-S细胞仍具有自我更新能力，能形成新的克隆，同时表达相关CSC标记物，CD24在SCC9-S细胞中表达明显下降，CD44在两组细胞中均为高表达，而CD133在两组细胞中均不表达，SCC9-S细胞为CD133-, CD44high/CD24low， SCC9-N细胞为CD133-,CD44high/CD24+。结论：本实验成功构建了pEGFP-N1-Snail真核表达质粒，并获得了增强表达Snail的稳定细胞株，Snail作为转录抑制因子能诱导SCC9细胞发生EMT，并使间质细胞具有了CSC样特点。进一步证实了Snail在口腔癌侵袭转移过程中的重要作用。