【摘 要】
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糖尿病是一种由糖代谢紊乱引起以高血糖为典型特征的代谢性慢性疾病。肠道菌群紊乱、胰岛β细胞受损或分泌功能障碍与糖尿病的发生发展密切相关。黄连是治疗糖尿病的传统中药,目前,对其生物碱类活性成分小檗碱与配伍治疗糖尿病的研究较多,但传统汤剂治疗糖尿病的具体机制尚不明确。本研究首先分析了黄连中主要生物活性物质-生物碱类物质成分及其具体含量,以评估其质量;再从肠道菌群稳态及胰岛β细胞功能等两个角度探讨黄连水提
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糖尿病是一种由糖代谢紊乱引起以高血糖为典型特征的代谢性慢性疾病。肠道菌群紊乱、胰岛β细胞受损或分泌功能障碍与糖尿病的发生发展密切相关。黄连是治疗糖尿病的传统中药,目前,对其生物碱类活性成分小檗碱与配伍治疗糖尿病的研究较多,但传统汤剂治疗糖尿病的具体机制尚不明确。本研究首先分析了黄连中主要生物活性物质-生物碱类物质成分及其具体含量,以评估其质量;再从肠道菌群稳态及胰岛β细胞功能等两个角度探讨黄连水提物的作用机制,为传统中药治疗糖尿病的机制研究和开发利用提供新的视角和数据基础。本研究主要从以下几个方面进行,结果如下:1、利用热浸法对黄连浸出物进行测定、紫外分光光度法对黄连总生物碱含量进行检测、高效液相色谱(HPLC)对1%盐酸甲醇溶液提取的黄连小檗碱进行含量测定。结果得出黄连浸出物、总生物碱及小檗碱含量分别为24.88%、14.29%、6.68%,达到中国药典对黄连的质量要求。同时利用HPLC检测出水煎形式制备的黄连水提物中小檗碱的含量为3.26%。2、基于人体肠道微生态系统模拟装置(SHIME),用黄连水提物干预2型糖尿病(T2D)患者的肠道菌群。通过16S r RNA高通量测序技术分析黄连水提物对T2D患者肠道菌群的影响,用气相色谱技术分析黄连干预后菌群代谢产物短链脂肪酸(SCFAs)的代谢变化。结果表明,黄连干预后变形菌门及拟杆菌门丰度降低,厚壁菌门与互养菌门丰度增加,志贺氏菌属、不动杆菌属、拟杆菌及肠球菌丰度降低,互养菌属、考拉杆菌属、巨单胞菌属及乳酸杆菌丰度增加(P<0.05)。SCFAs含量显著增加,丙酸、异丁酸、丁酸及异戊酸在维持期含量均显著增加,分别增加了175.85%、123.46%、43.70%、167.52%,且均高于干预期。3、利用小鼠胰岛β细胞(MIN-6)探究黄连水提物对胰岛细胞功能的影响及其机制。利用CCK-8试剂检测细胞活性,发现黄连水提物(30 mg·m L-1)稀释100倍与1000倍对细胞活力产生显著影响,而稀释10000倍或更高倍数对细胞活力无显著影响。选择稀释10000倍的黄连水提物处理MIN-6细胞24 h,发现黄连水提物在低糖(2.8m M葡萄糖)与高糖(16.7m M葡萄糖)浓度刺激下胰岛β细胞胰岛素的分泌量增加了37.68%与27.71%。通过细胞免疫荧光技术和Western blot技术发现黄连水提物的处理使自噬标志蛋白LC3的转换量增加,m TOR总蛋白及下游核蛋白S6K的磷酸化水平无明显变化,AMPK的磷酸化水平增强。在黄连低糖组与黄连高糖组分别加入自噬抑制剂3MA,胰岛素的分泌量分别减少了76.99 n IU/m L与216.38 n IU/m L。结论:黄连水提物能够有效地改善T2D患者肠道菌群紊乱,促进SCFAs的产生,改善肠道健康;并且能够通过AMPK途径诱导自噬促进胰岛β细胞胰岛素分泌。
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