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本试验研究建立在实验室己构建的柔嫩艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗pcDNA3.1-TA4-IL-2基础上,重新构建DNA疫苗pVAX1.0-TA4-IL-2。以新兽药申报为目标,根据我国《农业转基因生物安全管理条例》的规定,对该疫苗效力试验中的若干关键问题进行了较为系统的研究,旨在研究柔嫩艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗pVAX1.0-TA4-IL-2的免疫持续期,为本疫苗的应用奠定理论基础和提供相关实验依据。研究主要包括以下几个方面：1.DNA疫苗pVAX1.0-TA4-IL-2最佳免疫剂量的筛选。DNA疫苗分别以2μg,15μg,25μg,50μg,100gg,200μg免疫试验组雏鸡,同时设置非感染非免疫组,感染非免疫组,每组35只。试验组按照相应的免疫剂量14日龄腿部肌肉注射DNA疫苗pVAX1.0-TA4-IL-2,21日龄加强免疫,对照组注射PBS。28日龄,除非免疫非攻虫组外,其余均经口接种新鲜的柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊5×104个/羽,攻虫7天后,剖杀所有实验鸡,检测其免疫保护效果,对增重效果,克盲肠内容物卵囊数(OPG),盲肠病变记分,抗球虫指数(ACI)等指标进行统计。结果发现,重组质粒pVAX1.0-TA4-IL-2,2μg,15μg,25μg,50μg,100μg,200μg6个剂量组的ACI分别是166.64,190.2,194.42,173.00,126.69,124.14,其中免疫效果最好的是25μg组。2.DNA疫苗pVAX1.0-TA4-IL-2三批次制品的稳定性试验。制备3批DNA疫苗,试验组14日龄腿部肌肉注射25μg DNA疫苗pVAX1.0-TA4-IL-2,21日龄加强免疫,对照组注射PBS。除非免疫非攻虫组外,其余于28日龄经口接种新鲜的柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊5×104个/羽,攻虫7天后剖杀所有实验鸡,检测其免疫保护效果,对增重效果,克盲肠内容物卵囊数(OPG),盲肠病变记分,抗球虫指数(ACI)等指标进行统计。结果发现,重组质粒pVAX1.0-TA4-IL-2的3批疫苗制品ACI分别是187.52,191.57,185.22,说明3批次疫苗制品稳定性、均一性较好。3.DNA疫苗pVAX1.0-TA4-IL-2疫苗免疫保护期试验。试验分为A,B,C,D,E5组,每组又分为试验组,非感染非免疫组,感染非免疫组。试验组14日龄腿部肌肉注射25μgDNA疫苗,21日龄加强免疫,对照组注射PBS。A, B, C, D,E组中除非免疫非攻虫组外,试验组和感染非免疫组分别于56,84,112,140,168日龄,经口接种新鲜的柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊5×104个/羽,攻虫7天后剖杀所有实验鸡,检测其免疫保护效果,对增重效果,克盲肠内容物卵囊数(OPG),盲肠病变记分,抗球虫指数ACI等指标进行统计。结果发现,重组质粒pVAX1.0-TA4-IL-2疫苗免疫后2-6个月抗球虫指数ACI分别为182.28,162.23,154.58,150.54,144.53,说明疫苗的免疫持续期为2-3个月。4.免疫后动物体内抗体消长规律的研究。试验分为试验组和非感染非免疫对照组2组,每组35只雏鸡,试验组14日龄腿部肌肉注射DNA疫苗25μg,21日龄加强免疫,对照组注射PBS。每只鸡自免疫当天起,每隔一周采集血清,以自己建立的ELISA方法检测免疫鸡的抗体消长规律。结果显示,动物在第一次免疫1周(14日龄)后就有抗体产生,二次免疫后(21日龄)抗体效价升高,在第5周时抗体达到高峰然后逐渐下降,这与免疫保护期中的结果对应,证明疫苗在两个月时产生的抗体效价比较高,两个月后疫苗保护效果一般。