猪圆环病毒2型全病毒及其Cap蛋白重组腺病毒灭活疫苗研究

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猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2)是引起断奶仔猪多系统衰弱综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS)的主要病原,该病主要表现为体重下降,呼吸困难,黄疸以及间质性肺炎,淋巴结肿大,肝炎和肾炎等症状。PMWS主要感染断奶仔猪和育肥猪,自1991年在加拿大发生后,迅速蔓延到各养猪国家,成为目前危害世界养猪业的重要疫病之一。 本研究将猪圆环病毒2型(PCV2)用0.2%的甲醛37℃作用一定时间后接种PK-15细胞,盲传3代,用PCR方法检测灭活效果。将灭活的PCV2加入适量的白油和氢氧化铝胶制成PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗后免疫小鼠,共免疫2次,时间间隔3周,分别于一免后21天和35天进行BLISA抗体检测。同时为了评价国产油佐剂和进口油佐剂的免疫效果,我们进行了猪体免疫效力试验。通过ELISA抗体、攻毒后临床表现及体温变化、剖解时的病理变化、平均日增重及病毒血症等指标对疫苗效果进行评价。结果为:①PCV2能被0.2%甲醛完全灭活,时间为16 h。②PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答,并且油佐剂灭活疫苗免疫效果好于铝胶佐剂灭活疫苗。③猪体免疫效力试验表明,两油苗均产生较高水平的ELISA抗体。攻毒后,攻毒对照猪平均体温高于免疫猪,空白对照猪在整个攻毒期中体温始终保持正常。攻毒后免疫猪及空白对照猪平均体重均升高,而攻毒对照猪平均体重有所降低,且两免疫组和空白对照组之间平均日增重差异显著(P<0.05)。病毒血症检测表明,攻毒21天后未在免疫猪血清中检测到PCV2,而在两头攻毒对照猪血清中都检测到了PCV2。用PCR方法检测PCV2在肺脏、脾脏和淋巴结中的分布表明,攻毒后40天,攻毒对照猪在肺脏、脾脏和淋巴结中都检测到了病毒,而免疫组8头猪中仅在1头猪的脾脏中检测到病毒。 此外,本研究还将PCV2-Cap蛋白重组腺病毒(rAd-Cap)用0.2%的甲醛37℃作用一定时间后接种293细胞,盲传3代,检测灭活效果。将rAd-Cap灭活后,加入适量的白油和氢氧化铝胶制成Cap蛋白重组腺病毒油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗,免疫小鼠,3周后加强免疫一次,然后在一免后21天和35天进行ELISA抗体检测。为了进一步评价国产油佐剂和进口油佐剂的免疫效果,我们进行了猪体免疫效力试验。通过ELISA抗体、攻毒后临床表现及体温变化、剖解时的病理变化、平均日增重及病毒血症等指标对疫苗效果进行评价。结果为:①rAd-Cap能被甲醛完全灭活,时间为14 h。
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