真菌毒素量子点免疫层析试纸条的研发

来源 :天津科技大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:eboy120
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本论文使用量子点作为标记物,利用竞争抑制免疫层析原理建立了一种检测谷物样品中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的快速免疫分析方法。采用活化酯法制备了量子点标记赭曲霉毒素A抗体。检测赭曲霉毒素A的量子点标记免疫层析试纸条制备时最佳工作条件为:量子点(QDs)与EDC和抗体的摩尔比为1:1500:10;偶联量子点标记抗体的最佳pH值为8.3;包被抗原稀释倍数为1:5;二抗稀释倍数为1:250;硝酸纤维素膜型号为MiliporeHF135s;样品稀释液为硼酸盐(pH 8.3)缓冲溶液;上样液为样品稀释液、量子点标记的抗体与工作液共为100 μL的混合液;其中工作液添加量为3 μL, QDs-Ab添加量为1 μL。检测时以湿法上样,该试纸条方法检出限为0.5 μg/L,与其他种类的真菌毒素无交叉反应,特异性良好。检测时间为10分钟。玉米和小米样品中赭曲霉毒素A检测限为4 μg/kg,大麦、燕麦、大米、绿豆样品中赭曲霉毒素A检测限为5 μg/kg。采用活化酯法制备了量子点标记玉米赤霉烯酮抗体。检测玉米赤霉烯酮的量子点标记免疫层析试纸条制备时最佳工作条件为:量子点(QDs)与EDC和抗体的摩尔比为1:1000:5;偶联量子点标记抗体的最佳pH值为8.3;包被抗原稀释倍数为1:14;二抗稀释倍数为1:80;硝酸纤维素膜型号为MiliporeHF135s;样品稀释液为PBS(pH 7.4)缓冲溶液;上样液为样品稀释液、量子点标记的抗体与工作液共为100μL的混合液;其中工作液添加量为5μL,QDs-Ab添加量为1μL。检测时采用湿法上样,该试纸条方法检测限为1 μg/L,与其结构类似物有一定的交叉但是与他种类的真菌毒素无交叉反应。检测时间为10分钟。谷物样品中玉米赤霉烯酮检测限为10 μg/kg。本课题所建立的检测谷物中真菌毒素的快速免疫分析方法,灵敏度高、特异性好、样品前处理方法简单,检测时间短,结果判断容易,适用于大批量现场检测。
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