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胰蛋白酶是鱼类消化道中主要的碱性蛋白水解酶之一,属丝氨酸蛋白酶类,多存在于鱼类肝胰脏和幽门垂中,以酶原形式分泌,进入消化道后在肠激酶和Ca2+的作用下,去除激活肽后成为有活性的胰蛋白酶。鱼类的食性可分为草食性、肉食性和杂食性。本实验分别选取三种食性鱼类中常见的草鱼、青鱼和鲫鱼作代表,对其胰蛋白酶进行分离提纯,比较不同食性鱼类胰蛋白酶在催化性质上的差异,并采用蛋白消化率和酶解动力学相结合的方法,对胰蛋白酶纯化酶液在离体条件下的酶解消化力进行较全面的研究,为研制和开发不同食性鱼类配合饲料、提高饲料蛋白的利用率提供一定的理论基础。1、不同食性鱼类胰蛋白酶的分离纯化草鱼、鲫鱼、青鱼胰蛋白酶的分离纯化主要通过粗提液的提取、硫酸铵分级沉淀、亲和层析和SDS-PAGE测定分子量四步进行。结果显示,分别使用40%-80%、30%-70%、20%-60%的硫酸铵溶液可收集到大部分草鱼、鲫鱼、青鱼的胰蛋白酶。亲和层析洗脱时均使用pH3.0的洗脱液得到较好的洗脱峰,经测定具有胰蛋白酶活性。SDS-PAGE电泳均只得到单一条带,测定得草鱼、鲫鱼、青鱼胰蛋白酶相对分子量分别为27.3KDa、26.7KDa、42.1KDa。草鱼、鲫鱼、青鱼胰蛋白的最终酶纯化倍数分别为122.25、130.46和128.39,最终产率分别为14.64%、16.63%和17.65%。2、不同食性鱼类胰蛋白酶部分性质的比较研究以BAPNA作为水解底物,测得草鱼、鲫鱼、青鱼胰蛋白酶的米氏常数Km值分别为0.030mol·L-1.0.036mol·L-1、0.027mol·L-1。以TAME作为底物,测得草鱼和鲫鱼的胰蛋白酶的最适pH为8.5,而青鱼的为9.0。草鱼和鲫鱼胰蛋白酶在pH6.0-10.0范围内相对较稳定,而青鱼的在pH7.0-10.0范围内稳定性较高。三种鱼胰蛋白酶的最适温度均在40℃左右,在20-50℃其胰蛋白酶活性相对较稳定。Na+、Ca2+两种离子对这三种不同食性鱼类胰蛋白酶活性都没有明显的影响,K+对其均有抑制作用,而Mg2+对其都具有激活作用,但激活强度随着Mg2+浓度的增加而变弱。EDTA对其均具有较强的抑制作用。3、不同食性鱼类胰蛋白酶消化能力的比较研究在离体环境中测定草鱼、鲫鱼、青鱼胰蛋白酶纯化酶液对牛血清白蛋白、酪蛋白、豆粕、棉粕、菜粕、鱼粉和麦麸的酶解动力学和离体消化率,并对其进行比较。草鱼胰蛋白酶纯化酶液酶解这七种蛋白质样品生成氨基酸的速率表现为酪蛋白>菜粕>棉粕>鱼粉>牛血清白蛋白>豆粕>麦麸,鲫鱼的为酪蛋白>菜粕>牛血清白蛋白>鱼粉>豆粕>棉粕>麦麸,而青鱼的为酪蛋白>鱼粉>棉粕>菜粕>豆粕>牛血清白蛋白>麦麸,以上测定结果均表现为差异显著(P<0.05)。青鱼胰蛋白酶对鱼粉酶解后产生氨基酸的速率要明显高于菜粕和豆粕的,而草鱼的胰蛋白酶对菜粕和棉粕的酶解能力要明显高于鱼粉的。由此看来,草食性鱼类的胰蛋白酶对植物性蛋白的消化力较强,而肉食性鱼类的胰蛋白酶对动物性蛋白的消化力较强。