缺血性脑血管疾病以其高发病率、高病死率、高致残率、高复发率而严重危害人们的健康和生存质量，越来越受到人们的重视。增龄因素在脑血管疾病的发病中起着重要作用，发病率和死亡率与年龄增长呈线性相关。随着老年人口增多及老龄化社会的到来，深入研究老年缺血性脑卒中的发病机制，寻求有效的治疗方案尤显重要。 脑缺血再灌注损伤是缺血性脑血管疾病的重要病理生理机制，炎症级联反应参与缺血再灌注损伤，拮抗脑缺血再灌注损伤及其炎症反应是治疗脑梗死的有效措施。脑缺血再灌注激活炎症细胞，诱发炎性细胞因子和细胞黏附分子过度表达，后者进一步激活炎症细胞，产生炎症级联反应，促进脑缺血再灌注损伤的发展。以往对老年缺血性脑血管疾病的实验研究中多使用青年动物，忽视了脑血管疾病中的增龄因素，致使研究结果与临床有较大差距。目前，从观察整体炎症级联反应动态变化为切入点，开展脑缺血再灌注病理生理机制研究较少，以老年动物为研究对象及以解毒降浊、益气活血方药对脑缺血再灌注炎症级联反应干预的研究则未见报道。本课题采用老龄大鼠复制局灶性大脑中动脉栓塞模型，从炎症反应变化为切入点，观察老年脑缺血再灌注损伤一系列炎性细胞因子和介质表达规律的分子机制，及具有解毒降浊、益气活血功效的脑脉通对其影响，以探讨老年缺血性脑损伤的病理生理机制和脑脉通的治疗作用机制，对于揭示老年脑梗死的病理生理机制及指导中医药临床应用具有重要意义。 1老龄大鼠脑缺血再灌注损伤变化及脑脉通的保护作用 SD青年大鼠36只，雄性，4～5月龄，随机分为青年假手术组6只、青年模型组30只；SD老龄大鼠108只，雄性，20～22月龄，随机分为老龄假手术组、老龄模型组、脑脉通组(大、中、小剂量)、尼莫地平组，其中老龄假手术组动物6只，脑脉通大、小剂量组动物12只，观察缺血再灌注12d时间点，余各组根据再灌注时间的不同分为缺血3h、再灌注1d、3d、6d、12d共5个时间点，每个时间点6只动物。各组动物实验前4天灌胃，脑脉通大、中、小剂组及尼莫地平组药物浓度分别为1.8g·kg-1·d-1、0.9g·kg-1·d-1、0.45g·kg-1·d-1、6mg·kg-1·d-1，青年假手术组、青年模型组、老龄假手术组及老龄模型组以等体积生理盐水灌胃。灌胃第5天参照改良的Longa等的线栓法局灶性脑缺血动物模型进行复制，假手术组动物仅分离CCA、ICA、ECA，不进行线栓阻断血供，实验中合理控制室温、动物体温及血压。造模成功后观察再灌注24h、3d、6d及12d的动物在动物清醒后进行加灌药物。大鼠在各时间点测定神经症状积分，后快速断头取脑，分别检测脑组织含水量、脑组织梗死面积测定、免疫组化、光电镜病理，各组随机选取两只动物，取左侧大脑皮质部位作电镜观察。 结果：①神经症状积分变化青年模型组大鼠各时点均高于假手术组，I/R3d组高于I/R12d组。老龄大鼠组间比较：老龄模型组大鼠各时间点神经症状积分均高于老龄假手术组；I/R3d、I/R6d组高于I/R12d组。与青年大鼠相同时间点比较：老龄大鼠模型组I3h、I/R6d增高。与老龄大鼠模型组相同时间点比较：脑脉通组I/R3d、I/R6d、I/R12d降低。与尼莫地平组相同时间点比较：脑脉通组I/R6d、I/R12d降低。②脑组织梗死面积变化青年大鼠组间比较：青年模型组大鼠各时点均高于假手术组组；I/R1d、I/R3d、I/R6d、I/R12d组高于I3h组；I/R6d组高于I/R1d组。老龄大鼠组间比较：老龄模型组大鼠各时间点梗死面积均高于老龄假手术组；I/R1d、I/R3d、I/R6d、I/R12d组高于I3h组；I/R3d、I/R6d组高于I/R12d组。与青年大鼠相同时间点比较：老龄大鼠模型组I3h、I/R3d增高。与老龄大鼠模型组相同时间点比较：脑脉通各时间点组均降低。与尼莫地平组相同时间点比较：脑脉通各组均降低。③脑组织含水量变化青年大鼠组间比较：青年模型组大鼠I/R1d、I/R3d、I/R6d均高于假手术组；I/R1d、I/R3d组高于I3h组；I/R1d、I/R3d组高于I/R12d组。老龄大鼠组间比较：老龄模型组I/R1d、I/R3d、I/R6d均高于老龄假手术组、I3h组；I/R1d、I/R3d、I/R6d组高于I/R12d组。与青年大鼠相同时间点比较：老龄大鼠模型组含水量差异无统计学意义。与老龄大鼠模型组相同时间点比较：脑脉通组I/R1d、I/R3d、I/R6d降低。与尼莫地平组相同时间点比较：脑脉通组含水量差异无统计学意义。④组织病理损伤光镜下：青年模型组可见神经纤维排列紊乱，血管壁肿胀，血管管周水肿，有炎细胞浸润。与青年模型组比较，老龄模型组神经元细胞减少，血管扩张水肿，管周高度水肿，部分管腔受压变形，炎细胞浸润明显、形成“血管套”，组织结构欠清晰。脑脉通组(I/R3d)神经纤维排列紊乱，血管轻度扩张，管周水肿，管周有炎性细胞浸润，部分血管受压变形。电镜下：青年模型组神经元线粒体水肿，线粒体嵴和膜部分消失；管周轻度、中度水肿，基底膜断裂。与青年模型组比较，老龄模型组可见，神经细胞线粒体水肿加重，细胞器大量减少；血管基底膜厚薄不均，部分溶解、断裂及缺损。脑脉通组(I/R3d)可见神经元线粒体水肿，部分膜和嵴消失，可见管周水肿，基底膜局部水肿。 结论：①老龄及青年模型组大鼠脑缺血再灌注损伤随再灌注时间延长而加重(I3h～I/R6d)。表现为随再灌注时间的延长，神经症状积分、脑组织含水量、脑梗死面积及病理损伤加重。②与青年大鼠比较，老龄大鼠脑缺血再灌注损伤程度较重。表现为神经症状积分、脑组织含水量、脑梗死面积增加，病理损伤加重。其机制可能与增龄后脑缺血炎症反应的变化有一定关系。这可能是老年人脑梗死病情较重、死亡率较高的病理生理机制之一。③脑脉通对老龄大鼠脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用，以中剂量疗效尤为显著。表现为脑脉通可使神经症状积分、脑组织含水量、脑梗死面积降低，病理损伤减轻。其脑保护作用可能与其拮抗炎症级联反应有关。 2老龄大鼠脑缺血再灌注炎症级联反应的变化及脑脉通对其干预作用 应用免疫组织化学方法动态观察不同时间点老龄与青年大鼠脑缺血再灌注后脑组织一系列炎性介质(NF-κB、HSP70、TNF-α、ICAM-1、ICAM-1mRNA、VCAM-1、eNOS、iNOS、nNOS)表达的变化规律及脑脉通对其影响。 结果：①NF-κB表达水平变化青年大鼠组间比较：I/R1d、I/R3d、I/R6d、I/R12d组表达高于假手术组、I3h组；I/R1d、I/R3d组高于I/R6d、I/R12d组。老龄大鼠组间比较：I/R1d、I/R3d、I/R6d、I/R12d组表达高于假手术组、I3h组；I/R1d、I/R3d组表达高于I/R6d、I/R12d组。与青年大鼠相同时间点比较：老龄大鼠模型组I/R1d、I/R3d表达增高。与老龄大鼠模型组相同时间点比较：脑脉通组I/R1d、I/R3d、I/R6d、I/R12d表达降低。与尼莫地平组相同时间点比较：脑脉通组I/R1d表达降低。②HSP70表达水平变化青年大鼠组间比较：I3h、I/R1d、I/R3d、I/R6d组表达高于假手术组；I3h、I/R1d、I/R3d组高于I/R6d、I/R12d组。老龄大鼠组间比较：I3h、I/R1d、I/R3d组表达高于假手术组；I/R1d、I/R3d组表达高于I/R6d、I/R12d组。与青年大鼠相同时间点比较：老龄大鼠模型组I3h、I/R1d表达降低。与老龄大鼠模型组相同时间点比较：脑脉通组I/R1d、I/R3d、I/R6d、I/R12d表达增加。与尼莫地平组相同时间点比较：脑脉通组I/R1d表达增加。③TNF-α表达水平变化青年大鼠组间比较：I3h、I/R1d、I/R3d、I/R6d组表达均高于与青年假手术组；I/R1d组表达高于I/R3d、I/R6d、I/R12d组。老龄大鼠组间比较：I3h、I/R1d、I/R3d、I/R6d组表达高于老龄假手术组；I/R1d组高于I3h、I/R3d、I/R6d、I/R12d组；I/R3d组高于I/R6、I/R12d组。与青年模型组大鼠相同时间点比较：老龄大鼠模型组I/R1d、I/R3d表达增高。与老龄模型组相同时间点比较：脑脉通I3h、I/R1d、I/R3d组。与尼莫地平组大鼠相同时间点比较：脑脉通组I/R1d表达水平降低。 结论：①炎症级联反应参与脑缺血再灌注损伤。表现为大鼠脑缺血再灌注后炎症级联反应信号转导途径激活(NF-κB表达增加)，促炎细胞因子(TNF-α)表达增强，炎性细胞黏附性增强(ICAM-1、ICAM-1mRAN、VCAM-1表达上调)。 ②老龄大鼠脑缺血再灌注炎症级联反应较青年大鼠严重，且持续时间长、不易恢复。其机制与老龄大鼠脑缺血再灌注后促进炎症反应及炎性损伤发生发展的NF-κB、TNF-α、ICAM-1、ICAM-1mRAN、VCAM-1、iNOS、nNOS表达增加；及抑制因素HSP70、eNOS表达较弱有关。这可能是老年人脑梗死病情重、致残率和死亡率较高的病理生理机制之一。 ③脑脉通可有效抑制老龄大鼠脑缺血再灌注炎症级联反应。表现为脑脉通可降低有促炎作用的NF-κB、TNF-α、ICAM-1、ICAM-1mRNA、VCAM-1、iNOS、nNOS的表达，增加有神经保护作用的HSP70、eNOS表达，从而发挥拈抗脑缺血再灌注损伤作用。