Micro RNA（mi RNA）是一类长度为20 nt左右的微小非编码单链RNA,主要通过抑制靶基因来调控转录后的基因表达。mi RNA活跃地参与在多种细胞生命活动中,其中包括在骨骼肌生长发育的表观遗传调控中。本研究以mi R-146b-3p为研究主体,从表观遗传的角度上探索mi R-146b-3p对鸡肌肉发育的调控,为进一步研究mi RNA调控鸡骨骼肌生长发育提供理论基础。根据本课题组前期的mi RNA测序,我们发现了mi R-146b-3p在隐性白羽洛克鸡和杏花鸡之间差异表达,推断mi R-146b-3p可能是影响鸡骨骼肌生长发育的候选因子。已有不少mi RNA被证明与肌肉的生长发育有关,但是mi R-146b-3p对鸡的骨骼肌生长发育的调控机理尚未见报道。本研究主要从预测的mi R-146b-3p的两个靶基因AKT1和MDFIC基因出发,使用鹌鹑成肌细胞系QM-7细胞和鸡原代成肌细胞CPM,深入探讨mi R-146b-3p对成肌细胞增殖,分化和凋亡的影响。主要研究内容和结果如下:1.在QM-7细胞系和CPM细胞上分别进行mi R-146b-3p的过表达与抑制后,进行q RT-PCR、Ed U和流式细胞术测细胞周期实验来探究mi R-146b-3p对成肌细胞的增殖效应。实验结果表明mi R-146b-3p抑制成肌细胞的细胞周期,进而抑制细胞增殖。2.分别在细胞以及活体水平上构建mi R-146b-3p的时间表达谱,应用q RT-PCR以及Western Blot验证mi R-146b-3p对成肌细胞分化相关基因的调控作用;应用免疫荧光实验探索mi R-146b-3p对肌管形成的影响。结果表明,mi R-146b-3p在成肌细胞分化过程中呈现波动下降趋势,抑制分化相关基因在m RNA和蛋白水平上的表达,抑制肌管的形成。3.应用流式细胞术检测mi R-146b-3p对成肌细胞凋亡的影响,q RT-PCR和Western Blot验证mi R-146b-3p对成肌细胞凋亡相关基因的调控。结果显示,mi R-146b-3p能够促进成肌细胞的早期凋亡与晚期凋亡,促进凋亡相关基因在m RNA和蛋白水平上的表达。4.预测mi R-146b-3p的靶标基因,q RT-PCR和Western Blot验证mi R-146b-3p对靶标基因的下调作用,双荧光素酶报告载体实验验证mi R-146b-3p与预测靶标之间的靶向关系并进行功能回复验证实验。结果表明,mi R-146b-3p能够靶向抑制AKT1与MDFIC基因,并且AKT1与MDFIC基因能够回复mi R-146b-3p在成肌细胞增殖、分化与凋亡的作用。5.分别构建AKT1和MDFIC基因的过表达载体,并合成它们的si RNA,进行细胞转染实验和q RT-PCR实验验证过表达载体的表达率与si RNA的干扰效率,实验结果表明构建的过表达载体过表达效应显著,si RNA的干扰效果显著,可以用于接下来的实验验证。6.运用相同的实验方法探究mi R-146b-3p的靶基因AKT1和MDFIC对成肌细胞增殖,分化,凋亡的效应,实验结果和mi R-146b-3p的相反。总的来说,mi R-146b-3p能够靶向AKT1和MDFIC基因,抑制成肌细胞的增殖和分化,促进成肌细胞的凋亡,而靶基因AKT1和MDFIC可以促进成肌细胞的增殖和分化,抑制成肌细胞的凋亡。mi R-146b-3p是一个调控鸡骨骼肌生长发育的重要mi RNA。