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本文采用聚合酶链式反应(PCR)技术对勒氏笛鲷、金焰笛鲷、红鳍笛鲷、紫红笛鲷、画眉笛鲷、星点笛鲷、约氏笛鲷、千年笛鲷和金带笛鲷的mtDNA的16SrRNA的部分基因片段进行了扩增。PCR产物纯化后经T载体连接进行克隆、测序,序列结果编辑后提交GenBank并获得序列登录号。比对后得到了有效长度为561bp的序列,A、T、G、C的含量平均为28.5%、22.2%、23.5%和25.8%,AT含量稍高于GC含量,9种笛鲷中碱基组成差异不大。利用MEGA软件检测到单碱基突变位点31个,变异位点68个,其中包括信息位点36个,在变异位点中69.23%的碱基替换是由于发生了转换,转换和颠换比为2.3。经过计算发现在9种笛鲷中勒氏笛鲷和金焰笛鲷、勒氏笛鲷和金带笛鲷的亲缘关系最近,碱基差异为2.57%;而红鳍笛鲷和金焰笛鲷、红鳍笛鲷和画眉笛鲷的距离则明显较大,碱基差异达到了7.03%。利用测得序列分别构建了NJ和MP分子系统树,选用高体长棘鲷为外群发现两种方法构建的系统树基本一致:红鳍笛鲷和千年笛鲷首先聚在一起作为独立的一枝分化出来,紫红笛鲷和约氏笛鲷聚为一小枝后与其他5种聚在一起。总体来看除红鳍笛鲷和千年笛鲷较近外,其他物种间均保持了一定的遗传距离,没有非常近的现象,这也说明了在南海海域的这九种笛鲷仍保持了自己的遗传特性。
对勒氏笛鲷、金焰笛鲷、红鳍笛鲷、紫红笛鲷和画眉笛鲷的ITS-1区进行了扩增,纯化产物后转入T载体进行克隆和双向测序,将序列结果提交GenBank并获得序列号。各物种序列长度差异很大,最长的勒氏笛鲷的ITS-1长度为769bp,而金焰笛鲷仅为566bp,尽管长度差异很大,但是其碱基组成却没有很大的差别。A、T、G、C含量平均为14.6%、17.0%、29.4%和39.1%,GC含量远远超过AT含量。经过比对发现插入或缺失位点共201个,变异位点376个,其中信息位点为144个。在变异位点中48.23%的碱基替换是发生了转换。转换颠换比值为0.9,这一比值远远低于正常DNA序列的比值。根据双参数和单参数两种模型计算的5种笛鲷的碱基差异都很大,一般都在40%以上,勒氏笛鲷和金焰笛鲷碱基差异为0.2418,相对较小,红鳍笛鲷和紫红笛鲷最小为0.1880。使用鳜鱼为外群构建的NJ和MP系统树基本上一致:勒氏笛鲷和金焰笛鲷聚为一枝,红鳍笛鲷和紫红聚为一枝,而画眉笛鲷作为独立的一枝出现。这和利用相对保守的16SrRNA序列构建的系统树基本上一致。
此外,本文还利用SSCP技术对上述5种笛鲷进行了初步分析。使用通用引物L14841和H15149从总DNA中均扩增出约380bp的Cyt-b片段,利用PAGE电泳分别从勒氏笛鲷、金焰笛鲷、红鳍笛鲷、紫红笛鲷和画眉笛鲷中检出了2种、1种、2种、2种和4种基因型。在5种笛鲷中画眉笛鲷的遗传多样性最高,而金焰笛鲷的相对较小。