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背景：基因修饰T细胞免疫治疗越来越显示出其优越性,在癌症患者的治疗上起到了积极的作用。然而,这种“超自然”T淋巴细胞的调控是临床基因和细胞治疗需要解决的关键问题,利用自杀基因系统调控基因修饰的细胞是基因治疗的安全措施之一。研究显示,iCasp9自杀基因系统能够高效快速的诱导细胞凋亡,并且iCasp9几乎全部是人源性的,所以转导细胞引起免疫反应的风险大大降低,因此,该系统受到了人们的广泛关注。目的：建立可诱导的Caspase9自杀基因系统诱导Jurkat T细胞,利用阳性化合物诱导细胞凋亡,获得T细胞条件消融的相关数据,为基因修饰T细胞的免疫治疗提供安全保障。方法：1、利用分子克隆技术将目的基因(FKBP12/Caspase9)克隆入慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EFl-puro中,构建piCasp9表达质粒,三质粒(piCasp9、pVSVG、 pDe18.9)磷酸钙法共转染293T细胞制备慢病毒(LV-KLC9),并进行滴度测定。2、用病毒液感染Jurkat T细胞,经puromycin筛选扩增。Western blot检测目的基因在细胞中的表达；利用Annexin V染色法对AP20187诱导二聚体介导的细胞凋亡情况进行分析。结果：1、成功构建piCasp9表达质粒,三质粒共转染293T细胞制备的慢病毒LV-KLC9具有高效性,72h后95%的293T细胞可以观察到绿色荧光。采用逐孔稀释滴度测定法测定病毒滴度,病毒滴度可达3.0×107 IU/ml。2、病毒感染Jurkat T细胞的效率达65%；Western blot检测发现约在49kD处出现明显的特异条带,而对照组无此条带,说明慢病毒将融合基因导入Jurkat细胞,并在细胞中成功表达。给予10 nM AP20187对细胞进行凋亡诱导,并于不同时间点检测细胞凋亡,流式细胞术结果显示：细胞凋亡率随着时间的延长逐渐增加,表现为时间依赖性的细胞死亡。结论：成功建立了iCasp9自杀基因系统可诱导细胞凋亡生物效应的细胞模型,体外给予AP20187后,携带目的基因的Jurkat细胞呈现时问依赖性的凋亡,这有望为基因修饰T细胞的免疫治疗提供安全保障。