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目的:环境因素是原发性胆汁性胆管炎(Primary Biliary Cholangitis,PBC)发病的重要因素,本研究拟探索多氯联苯126(3,3′,4,4′,5-pentachlorobiphenyl,PCB126)对PBC患者外周血自然杀伤(Natural Killer,NK)细胞活性和功能的影响及其可能的机制。方法:纳入就诊于我院风湿免疫科的PBC患者20例和同期体检的健康体检者20例。采用免疫磁珠分选获得NK细胞,利用流式细胞术检测NK细胞分选效率及PCB126刺激后NK细胞表面分子和胞内杀伤相关分子的表达水平。利用RT-PCR,Western Blot和ELISA检测NK细胞中芳香烃受体(Aryl hydrocarbon Receptor,AhR)及相关因子的表达水平。通过体外细胞共培养,采用CCK8和流式细胞术检测PCB126调控的NK细胞对人肝内胆管上皮细胞(Human Intrahepatic Biliary Epithelial Cells,HiBEC)的杀伤作用。结果:使用免疫磁珠法从外周血中分离得到高纯度(纯度>95%)的CD3-CD56+NK细胞。未经PCB126刺激时,PBC患者组的NK细胞IL6 mRNA(0.993±0.223vs 0.660±0.150,p>0.05)、AhR mRNA(2.230±0.371 vs 1.595±0.372,p>0.05)和CYP1A1mRNA(1.270±0.189 vs 1.062±0.268,p>0.05)较健康对照组升高,但差异无统计学意义。经PCB126刺激后,PBC患者组的NK细胞IL6 mRNA(1.811±0.202vs1.129±0.120,p<0.01)、AhR mRNA(4.884±0.794 vs 3.067±0.379,p<0.05)和CYP1A1 mRNA(2.207±0.271 vs 1.430±0.263,p<0.05)较健康对照组显著增高,差异具有统计学意义。在蛋白水平上发现未经PCB126刺激,PBC患者组的NK细胞AhR蛋白(0.839±0.109 vs 0.645±0.134,p>0.05)和CYP1A1蛋白(0.773±0.169 vs 0.612±0.237,p>0.05)水平略高于健康对照组,差异无统计学意义。经PCB126刺激后,PBC患者组的NK细胞AhR蛋白(1.786±0.146 vs 1.247±0.098,p<0.05)和CYP1A1蛋白(1.911±0.100 vs 1.347±0.108,p<0.05)表达显著高于健康对照组,差异具有统计学意义。未经PCB126刺激,PBC患者组和健康对照组的CD69~+NK细胞(21.867±1.534%vs 16.167±1.357%,p>0.05)和NKp44~+NK细胞(39.097±2.000%vs 37.550±1.156%,p>0.05)比例没有明显差异,在PCB126刺激后,PBC患者组的CD69~+NK细胞(60.867±2.458%vs 42.733±2.401%,p<0.01)和NKp44~+NK细胞(69.757±2.165%vs 45.833±2.441%,p<0.01)比例较健康对照组显著升高,差异具有统计学意义。未经PCB126刺激,PBC患者组的Perforin+NK细胞(35.030±1.573%vs 32.780±1.571%,p>0.05)和Granzyme B~+NK细胞(41.370±1.554%vs 36.893±1.861%,p>0.05)比例较健康对照组升高,但差异无统计学意义。经PCB126刺激后,PBC患者组的Perforin~+NK细胞(47.497±2.361%vs 39.297±1.237%,p<0.05)和Granzyme B~+NK细胞(50.700±1.440%vs 44.383±1.697%,p<0.05)比例较健康对照组明显升高,差异具有统计学意义。未经PCB126刺激,PBC患者组的NK细胞IFN-γ(156.517±7.362 pg/ml vs 145.542±27.444 pg/ml,p>0.05)和TNF-α(71.238±4.691 pg/ml vs 59.917±3.197 pg/ml,p>0.05)的表达量略高于正常人,而经PCB126刺激后,PBC患者组NK细胞IFN-γ(214.23±9.644 pg/ml vs 177.16±12.217 pg/ml,p<0.05)和TNF-α(95.983±4.993 pg/ml vs 69.255±4.331 pg/ml,p<0.001)升高的趋势更加明显,与PCB126刺激后的健康对照组相比,差异具有统计学意义。在健康对照组中,使用PCB126刺激后,NK细胞的杀伤能力及其诱导的Hi BEC凋亡均较使用PCB126前有所增强。在PBC患者组中,使用PCB126刺激后,NK细胞的杀伤能力及其诱导的HiBEC凋亡均较使用PCB126前有所增强,并且发现,在PCB126刺激后的PBC患者组NK细胞与PCB126刺激后的胆管上皮细胞共培养组中,NK细胞的杀伤能力及NK细胞诱导的HiBEC凋亡最强。结论:1.PCB126可诱导PBC患者NK细胞AhR、CYP1A1和IL6的表达上调,提示PCB126可能激活NK细胞AhR。2.PCB126可促进PBC患者NK细胞的活化、细胞毒性颗粒及炎性因子的表达,其机制可能与AhR的激活有关。3.PCB126刺激后的PBC患者NK细胞的杀伤活性及其诱导HiBEC凋亡的能力增强,PCB126可能通过直接毒性作用及增强NK细胞对HiBEC的杀伤能力的间接毒性作用加速PBC疾病的进展。