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【背景】食管癌是世界上第八大常见恶性肿瘤,第六大因癌症导致死亡的原因。目前全世界有45万多食管癌患者,并且其发病率仍在上升。食管癌诊断越早,预后越好。然而,由于缺乏有效的早期诊断手段,大部分患者首诊时已届进展期,其总的五年生存率仅为15%~25%,因此有必要探索有应用价值的食管癌分子标志物和靶分子,从而为食管癌的早期诊断和治疗提供线索。micro RNAs(mi RNAs)是一类在进化过程中高度保守的长度在18~25个核苷酸的单链非编码小RNA,主要通过抑制靶基因的翻译影响人体的各种生理和病理过程。前期我们通过mi RNA芯片检测了25例食管鳞癌及其癌旁组织的差异表达分子,率先发现并报道了一个食管癌发生相关的mi RNA分子群。其中,mi R-483在食管癌组织中高表达,但其对食管癌细胞恶性表型的影响及分子机制尚未阐明,本课题将对此展开研究。【目的】1.检测mi R-483-3p在食管鳞癌细胞系及正常食管鳞状上皮细胞系中的表达;2.构建mi R-483-3p过表达和低表达的食管癌细胞模型,通过体内外实验研究mi R-483-3p对食管癌生物学行为的影响;3.探讨mi R-483-3p影响食管癌发生的分子机制。【方法】1.q PCR检测mi R-483-3p在食管鳞癌细胞系及正常食管鳞状上皮细胞系中的表达;2.构建mi R-483-3p的慢病毒表达载体及空载体,转染食管癌细胞,建立过表达mi R-483-3p的细胞模型及相应对照细胞模型;3.合成mi R-483-3p inhibitor及inhibitor NC,转染食管癌细胞,建立低表达mi R-483-3p的细胞模型及相应对照细胞模型;4.MTT实验研究mi R-483-3p对食管癌细胞增殖的影响;5.Transwell实验观察mi R-483-3p对食管癌细胞迁移的影响;6.流式细胞仪检测mi R-483-3p对食管鳞癌细胞周期的影响;7.流式细胞仪检测mi R-483-3p对食管癌细胞凋亡的影响;8.MTT法体外药物敏感性实验检测mi R-483-3p对食管癌细胞药物敏感性的影响;9.裸鼠成瘤实验观察mi R-483-3p对食管癌细胞体内成瘤能力的影响;10.通过生物信息学及全基因组表达谱芯片联合预测的方法筛选mi R-483-3p的靶基因;11.通过q PCR、Western blot及双荧光素酶报告基因实验验证mi R-483-3p的靶基因。【结果】1.与正常食管鳞状上皮细胞系Het-1A相比,mi R-483-3p在食管鳞癌细胞系EC109、EC9706及TE-1中表达升高。2.成功建立了过表达和低表达mi R-483-3p的食管癌细胞模型。3.上调mi R-483-3p可促进食管癌细胞的增殖、迁移,促进细胞周期由G1期向G2期转化,减少ADR诱导的细胞凋亡,减弱细胞对化疗药物的敏感性,增强食管癌细胞的体内成瘤能力。4.下调mi R-483-3p可抑制食管癌细胞的增殖、迁移,导致细胞周期G1期阻滞,增加ADR诱导的细胞凋亡,增强细胞对化疗药物的敏感性。5.通过生物信息学和全基因组表达谱芯片联合预测,得到7个mi R-483-3p的靶基因:EI24、KLHL12、GRSF1、MKRN1、LEPROTL1、CREBL2、MAPKAPK2。6.上调食管癌细胞中mi R-483-3p的表达对以上7个靶基因的m RNA表达水平无影响。7.上调食管癌细胞中mi R-483-3p的表达可导致抑癌基因EI24的表达下降。【结论】1.与正常食管鳞状上皮细胞相比,mi R-483-3p在食管鳞癌细胞系中表达升高。2.上调mi R-483-3p表达可通过调节细胞周期促进食管癌细胞的增殖、迁移,增强细胞对化疗药物的耐药性;下调mi R-483-3p则起到相反的效果。3.mi R-483-3p可能通过调节EI24等靶基因的表达影响食管癌的发生发展。