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本文建立了沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌的同时检测方法,包括共增培养基及其三重荧光PCR检测方法,使水产品中主要致病菌的检测能够通过一步增殖培养和一步检测完成,大大缩短检测时间,简化检测步骤,提高检测效率。以BPW作为基础培养基,选择对目标菌具有促进作用或者对非目标菌具有抑制作用的添加剂进行单因素实验和响应面分析实验,研制了共增培养基SVV,其最佳配为：缓冲蛋白胨水20.1g/L、NaCl20g/L、亚碲酸钾1mg/L、3号胆盐2.5g/L、柠檬酸钠5g/L葡萄糖1.25g/L、甘露醇1.25g/L、亚硫酸钠1.25g/L以及丙酮酸纳0.05g/L。结果显示,SVV培养基能有效抑制竞争菌群,经过一步增殖即可有效富集单个目标菌或者混合目标菌生长至105-108cfu/mL。同时,SVV共增培养基具有良好的适用性,与PCR检测技术联用时与传统检测法的符合率达100%,能有效监测目标菌。以沙门氏菌的invA基因、副溶血弧菌的toxR基因和霍乱弧菌的hlyA基因为靶基因设计引物探针,对设计的多对引物探针组合进行实验筛选优化,获得最佳引物探针组合。向反应体系中添加抗干扰物质BSA 0.04%(w/v)和甲酰胺0.01%(w/v)提高PCR反应体系的抗干扰能力。通过优化反应组分浓度和反应条件,建立了抗干扰三重荧光PCR检测方法。25μL反应体系包含：1×Buffer, MgCl2 3.75mmol/L, dNTP mixture 1mmol/L,沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌的上下游引物浓度分别为0.5mmol/L、0.4 mmol/L、0.46mmol/L,探针浓度分别为0.18μmol/L、0.2μmol/L、0.22μmol/L, Taq DNA聚合酶2.5U,模板2μL。扩增程序为：94℃4min,94℃10s、60℃45s,40个循环。结果显示,该法的检测特异性达到100%,对目标菌的检测灵敏度分别为沙门氏菌1300cfu/mL、副溶血弧菌6400cfu/mL、霍乱弧菌2100cfu/mL。用本法与SVV共增培养基联用检测52份实际样品,准确率达100%,并能有效克服传统方法对副溶血弧菌的漏检。共增培养SVV突破了传统培养法中需要针对单一细菌进行两步培养,使三种目标菌通过一步培养即达到检测限以上。本文的三重荧光PCR能与简单的DNA提取方法联用,进一步简化了检测过程,并能保证PCR反应顺利进行。本文建立的SVV共增培养联合三重荧光PCR检测方法能快速、准确地监测沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌,可以应用于进出口水产品检验检疫和其它食品的日常监测。