桑黄(Phellinus baumii)俗称桑臣或桑耳,是一种珍贵的药用真菌,主要分布于中国、日本、菲律宾、澳大利亚、北美等地,桑黄的活性成分主要是多糖类、甾体类、萜类和黄酮类等。桑黄具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、降血糖和抗菌等多种药理活性,其中抗肿瘤作用是近年来研究的热点,各国学者对其抗肿瘤活性物质和抗肿瘤机理等方面进行了深入的研究,有望开发出一种新的抗肿瘤药物。目前对桑黄属真菌的研究主要集中于多糖提取、发酵条件优化和抗癌机理等方面。而对其黄酮类化合物的研究比较少,但也有逐渐增多的趋势。本文以桑黄为原料,进行毒理安全性实验,采用乙醇提取桑黄中的总黄酮,并通过单因素和响应曲面法优化提取工艺,利用大孔树脂法分离纯化桑黄总黄酮,利用液相色谱-质谱联用法进一步鉴定桑黄总黄酮,并对桑黄总黄酮的抗氧化活性和对DNA的保护作用进行研究,实验结果如下:桑黄的毒理学实验研究结果表明:小鼠的急性经口毒性实验测定属于无毒范围,三项遗传毒性实验结果均为阴性;初步验证了桑黄属无毒级,无遗传毒性作用。采用乙醇提取法对桑黄中的黄酮类化合物的提取工艺进行单因素试验,通过响应面法得到的最佳工艺条件为:提取温度为69.95℃、液料比为26.10、提取时间为3.81 h,乙醇体积分数为87.16%。考虑到实验具体的操作,确定浸提条件为:提取温度为70℃,液料比为26,提取时间为3.8 h,乙醇体积分数为87%,实际测得浸提液的总黄酮得率为14.36%,与理论预测值吻合,说明响应面对桑黄总黄酮浸提条件的优化是可行的。将得到的桑黄黄酮类化合物的粗提液进行大孔树脂的分离纯化,通过大孔树脂的静态实验,从6种大孔树脂中选出最佳的大孔树脂DM301进行黄酮类化合物的分离纯化。当上样量为20m L时,通过大孔树脂的静态和动态实验确定了纯化桑黄总黄酮的最佳工艺:桑黄总黄酮的上样流速为3 m L/min,上样体积为7 BV,洗脱液为80%乙醇,洗脱流速为1.5 m L/min,洗脱液的体积为4 BV,最后分离纯化得到的桑黄总黄酮的纯度为83.27%。通过外标法,经计算得出1g桑黄黄酮中含有16.3 mg的芦丁和0.13 mg的槲皮素。通过液相色谱-质谱法联用对桑黄中的黄酮类化合物进行分析,得到6种化合物。考察桑黄总黄酮的抗氧化活性和对DNA保护作用,实验结果表明桑黄总黄酮能够很好的清除DPPH·自由基、羟基自由基和超氧阴离子。通过还原力实验,发现桑黄总黄酮的还原力与相同浓度的Vc和BHT相比,相差不大,说明桑黄总黄酮具有较好的抗氧化活性能力。通过桑黄黄酮类化合物与DNA的紫外吸收光谱可知,在鲱鱼精DNA溶液中加入桑黄黄酮化合物后均出现了增色效应,说明鲱鱼精DNA与桑黄中的黄酮类化合物发生作用,形成复合物;通过荧光光谱可知,鲱鱼精DNA对桑黄黄酮具有明显的猝灭作用。在桑黄黄酮类化合物存在的条件下,用溴化以锭作为荧光探针,测定DNA和EB混合液的荧光积分强度,计算出作用常数D为43.7%。