目的:肿瘤干细胞（CSCs）被确定为肿瘤中独特的亚群,拥有启动肿瘤生长和维持肿瘤自我更新的能力,有研究显示胃癌中存在着对化疗耐药的肿瘤干细胞。本实验室前期工作表明,二烯丙基二硫（diallyl disulfide, DADS）可诱导人胃癌细胞增殖抑制、分化与细胞周期G2/M期阻滞,但其对肿瘤干细胞是否起抑制作用尚未阐明。本研究目的在于利用细胞表面标记CD44分选胃癌细胞系中的CSCs样细胞,然后分析DADS对其体外增殖能力与细胞周期分布的影响,并初步探讨DADS抑制人胃癌CSCs样细胞作用的分子机制。方法:1. RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学技术检测DADS对SGC7901细胞中Aurora-A、Aurora-B表达的影响。2. MACS技术筛选CD44（+）胃癌CSCs样细胞,通过荧光显微镜观察、软琼脂集落形成实验和流式细胞术进行初步鉴定。3.流式细胞术观察DADS对CD44（+）胃癌CSCs样细胞周期分布的影响4.免疫细胞化学分析DADS对CD44（+）胃癌CSCs样细胞Aurora-A、Aurora-B表达的影响。结果:1. RT-PCR结果显示,15mg·L-1 DADS处理SGC7901细胞24h、48h后,Aurora-A、Aurora-B mRNA表达明显下调（P<0.05）;Western blot发现,15mg·L-1 DADS处理SGC7901细胞24h、48h后,Aurora-A、Aurora-B蛋白表达水平呈时间依赖性下降（P<0.05）;免疫细胞化学结果表明,15mg·L-1 DADS处理SGC7901细胞24h、48h后,Aurora-A和Aurora-B蛋白表达逐渐降低（P<0.05）。2.荧光显微镜下观察发现,分选后CD44（+）组大多数细胞可清晰地呈现绿色荧光,其阳性率约为95%,明显高于分选前胃癌SGC7901细胞及分选后CD44（-）胃癌细胞（P<0.05）。倒置显微镜观察,三种细胞大而圆,胞浆丰富,在形态学上并无明显差异。3.软琼脂集落形成实验结果显示, CD44（+）胃癌CSCs样细胞组集落形成数（13.68±3.45）明显多于胃癌SGC7901细胞组（3.37±1.08）及CD44（-）胃癌细胞组（3.74±1.23）,差异有统计学意义（P<0.05）,而CD44（-）胃癌细胞组与胃癌SGC7901细胞组差异无统计学意义（P>0.05）。在集落形态上,CD44（+）细胞组较CD44（-）胃癌细胞及胃癌SGC7901细胞组形成的集落直径大、细胞数量多、透光度低。DADS处理CD44（+）细胞后集落形成结果:15mg·L^-1 DADS处理组（集落数为<6.75±3.25>）、30mg·L^-1 DADS处理组（集落数为<3.28±1.25>）集落数目明显低于CD44（+）细胞未处理组（13.48±4.08）,15、30mg·L^-1 DADS对CD44（+）细胞软琼脂集落形成的抑制率分别为49.93%、76.81%,抑制作用呈剂量依赖性关系（P<0.05）。在集落形态上,30mg·L^-1 DADS处理组较15mg·L^-1 DADS处理组及未处理组形成的集落直径小、细胞数量少、透光度高。4.流式细胞术结果显示:与分选后CD44（-）胃癌细胞组比较,分选后CD44（+）细胞周期中S期细胞百分比增高,且增殖指数也增高（P<0.05）,说明分选后CD44（+）细胞增殖能力较强。15mg·L^-1、30mg·L^-1 DADS分别处理分选CD44（+）细胞24h、48h,其S期细胞百分比逐渐下降,而G₂/M期细胞百分比明显高于未处理组（P<0.05）,且增殖指数也降低（P<0.05）,且呈明显的药物浓度依赖效应,表明DADS可明显抑制CD44（+）细胞的增殖并阻滞细胞于G₂/M期。5.免疫细胞化学结果显示:CD44（+）细胞中Aurora-A和Aurora-B蛋白表达呈强阳性,15mg·L^-1DADS处理后表达均明显下调（P<0.05）。结论:1.成功分选了人胃癌SGC7901中的CD44（+）CSCs样细胞。2. DADS可抑制CD44（+）胃癌CSCs样细胞增殖及阻滞细胞于G₂/M期。3. DADS可抑制SGC7901细胞及胃癌CSCs样细胞中Aurora-A、Aurora-B表达,Aurora-A、Aurora-B表达下调可能参与DADS抗胃癌作用。