目的：以脑缺血损伤大鼠为研究对象，通过观察脑缺血损伤大鼠不同时间点神经功能，脑组织含水量，脑梗死面积，脑组织病理的动态变化，探讨脑脉通联合骨髓干细胞动员剂对脑缺血后神经细胞损伤的保护作用；通过外周血及脑组织中CD34阳性细胞的变化，观察骨髓干细胞动员的效果；通过观察缺血区神经细胞相关特异性蛋白及脑组织神经营养因子的变化规律，揭示脑脉通和骨髓干细胞动员剂及其联合应用对脑缺血损伤后神经细胞的保护作用及其可能的作用机制。 方法：SD大鼠，清洁级，雌雄各半，3～4月，300±50g，202只。按随机数字表法将大鼠分为模型组、脑脉通组、骨髓干细胞动员剂组(简称动员组)、脑脉通骨联合髓干细胞动员剂组(简称联合组)。其中除假手术组为10只大鼠，其余4组均为48只，按取材时间点分为2d、3d、7d、14d组，其中每组大鼠12只。参照改良的Longa法制备局灶性脑缺血动物模型(MCAO)。术前4天脑脉通和联合组用脑脉通(40.5Mg.100g-1.d-1，)灌胃，假手术组、模型组、动员组用生理盐水灌胃，每天1次；术前3天动员组、联合组皮下注射rG-CSF(10ug.kg-1.d-1)，假手术组、模型组、脑脉通组用同等容积的生理盐水皮下注射，术后皮下注射2天，每天1次。腹主动脉取血，测定外周血白细胞计数及CD34+细胞的数量；断头取材，观察脑组织含水量、脑梗死面积、免疫组化。光镜下观察脑组织病理改变及在透射电子显微镜下观察细胞超微结构变化；免疫组化法测定脑组织中CD34+细胞、神经元特异性核蛋白(NEU)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、脑源性神经生长因子(BDNF)、胶质源性神经营养因子(GDNF)的表达变化。 结果： 1.假手术组血液中有极少量CD34+细胞，与假手术组相比，模型组大鼠血液中CD34+细胞数量升高，3d组达到峰值，7d和14d逐渐降低。与模型组相比，脑脉通组血液CD34+细胞总数在脑缺血损伤后变化不显著，动员组和联合组则显著升高，以3d组最多，联合7d组仍维持较高水平。与动员组相比，联合组血液CD34+细胞数量升高，以联合7d组尤为显著。大鼠外周血WBC的计数与CD34+细胞数量呈正相关。 2.假手术组脑组织中无CD34+细胞表达，与假手术组相比，模型组大鼠脑组织CD34+细胞表达在3d升高明显，7d达到峰值，以后逐渐降低；与模型组相比，脑脉通组脑组织CD34+细胞表达无显著变化，动员组和联合组显著升高，以7d组最显著，联合14d组仍有较显著表达；与脑脉通组相比，联合组、动员组脑组织CD34+细胞表达显著；与动员组相比，联合组脑组织CD34+细胞表达升高，以联合7d组尤为显著。 3.与假手术组比较，模型组大鼠神经功能评分降低、脑组织含水量显著升高、梗死面积扩大；光电镜病理观察模型组神经细胞有不同程度的损伤和结构破坏，以模型7d组最重；与模型组相比，脑脉通组和动员组及联合组的神经功能评分升高、脑组织含水量降低，脑梗死面积减小；与脑脉通组和动员组相比，联合组神经功能评分显著升高，脑组织含水量降低，梗死面积显著减小，以14d组尤为显著。光电镜病理观察脑脉通组和动员组及联合组神经细胞变性、坏死数量明显减少，间质水肿较轻，以联合14d组损伤最轻。 4.假手术组NEU、GFAP有少量表达；与假手术组比较，模型组大鼠NEU、GFAP表达升高，以7d组尤为显著；与模型组相比，脑脉通和动员组及联合组7d组和14d组的表达均显著升高；与脑脉通组和动员组相比，联合组NEU、GFAP阳性表达水显著升高，以14d组的阳性表达尤为显著。与7d组相比，模型3d组和14d组的NEU阳性表达水平分别低于7d组；脑脉通和动员14d组的阳性表达均高于7d组；联合7d组和14d组均较3d组显著升高，以14d组的阳性表达尤为显著。 5.大鼠脑组织BDNF、GDNF阳性细胞主要存在于梗死灶周边，假手术组BDNF、GDNF有少量表达；与假手术组比较，模型组大鼠BDNF、GDNF的阳性表达水平升高，以7d组尤为显著；与模型组相比，脑脉通和动员14d组表达水平显著升高；联合7d组和14d组的表达水平均显著升高，以14d组的表达尤其显著；与脑脉通组和动员组比较，联合组BDNF、GDNF表达均明显升高，以14d组的差异尤为显著。与7d组相比，脑脉通组、动员组14d组BDNF、GDNF的阳性表达高于7d组，3d组的阳性表达低于7d组，联合14d组的阳性表达较7d组显著升高。 结论： 1.经过应用骨髓干细胞动员剂后，大鼠血液WBC和CD34+细胞的数量明显增加，并且在脑缺血损伤组织中发现CD34+细胞表达增强，以及带有突起CD34+锥形细胞生长，骨髓干细胞动员效果明显，脑脉通能够促进骨髓干细胞的动员。 2.应用骨髓干细胞动员剂能明显改善脑缺血损伤后大鼠的神经功能，减轻脑水肿，降低脑梗死面积，减轻脑组织病理变化，对脑缺血损伤具有明显的保护作用，并随着时间的延长作用更为显著。脑脉通与骨髓干细胞动员剂联合应用能够增强上述疗效。 3.动员后的骨髓干细胞向脑缺血区发生迁移归巢，促进NEU、GFAP的分泌，对神经细胞具有保护作用，且脑脉通能够促进骨髓干细胞的存活、归巢和分化。 4.脑缺血损伤后，动员入脑组织的骨髓干细胞可分泌BDNF、GDNF等多种神经营养因子，脑脉通与其联合能够显著上调BDNF和GDNF的表达，延长其高表达时程，具有切实可靠的神经保护作用。