巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）作为目前广泛使用的真核表达系统之一,已被用于诸多外源蛋白的表达。毕赤酵母表达系统是基于其甲醇代谢途径,醇氧化酶1（alcohol oxidase1,AOX1）是甲醇代谢途径的关键酶和限速酶,P_AOX1可提供强而严紧的调控,被广泛应用于外源蛋白的表达。甲醇代谢调控是一个复杂的生物过程,涉及多个转录因子和信号通路,具体的分子机理仍不清楚。经转录组研究发现,毕赤酵母SUT2的表达可积极响应碳源变化,且在甲醇中有较高的表达量,该基因是一个潜在的转录因子,很可能参与了甲醇代谢。本研究对毕赤酵母SUT2进行了鉴定和应用,取得的主要研究成果如下:（1）毕赤酵母SUT2基因在甘油为碳源的培养基中表达受到抑制,而在甘油耗尽时以及甲醇环境中高表达,这一表达特性与P.pAOX1基因相似。通过AOX1基因的敲除和过表达发现,SUT2与AOX1的表达水平正相关。（2）甲醇可能是SUT2表达的主要诱导剂。通过比较甲醇和甲醛分别作碳源时SUT2的转录水平,发现了甲醇对SUT2表达的诱导效果均明显高于甲醛。此外,在野生型菌株中,不同诱导条件下SUT2的转录水平变化与AOX1十分类似。（3）毕赤酵母SUT2可能通过调控麦角固醇的合成来参与甲醇代谢。通过SUT2基因的敲除和过表达发现,SUT2的过表达可提高毕赤酵母AOX1的转录水平和蛋白水平,而SUT2的缺失会导致AOX1基因的转录水平明显降低。此外,毕赤酵母细胞内外麦角固醇含量与SUT2的表达水平呈正相关。结合已发表文献的报道和本研究的数据,我们推测出一条SUT2参与甲醇代谢的调控途径,为后续甲醇代谢关键基因的挖掘提供了参考。（4）分离鉴定了一个新的甲醇诱导型启动子即P_SUT2,用5′RACE实验技术鉴定了SUT2基因的转录起始位点为起始密码子上游第22个碱基“A”,通过5′端截短发现了P_SUT2响应甲醇的调控区大致在-973 bp到-547 bp内,并预测了P_SUT2的TATA box、CAAT box区。（5）应用P_SUT2这一诱导型启动子构建正向循环圈,优化毕赤酵母外源蛋白表达系统。本研究成功地将单位OD菌液外源蛋白表达量提高了18%,这为工业生产提供了新的方向。