论文部分内容阅读
1982年EGCG3"Me首次从绿茶中被分离出来,并发现其具有潜在的抗过敏活性。近年来,甲基化EGCG不断从茶叶和体内代谢物中被发现。1999年EGCG4"Me从乌龙茶中被分离出来。甲基化EGCG在抗过敏性、抗细胞毒素、抑制脂肪氧化酶和结核分支杆菌、抑制诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、保护肝细胞等方面都优于EGCG。常见的甲基化EGCG分离方法包括葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)、高速逆流色谱、Toyopearl HW-40S中压柱层析、制备型液相色谱(pHPLC)等方法。由于其在茶叶中含量不高,进行人工合成就存在着一定的必要性。甲基化EGCG的合成主要包括化学合成和生物合成。化学合成包括重氮甲烷合成法、碘甲烷合成法、硫酸二甲酯合成法、苄基保护基团合成法、硝基苯磺酰基保护基团合成法等五种方法。本文以没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)为原料,用硫酸二甲酯对其进行部分甲基化。甲基化产物经乙酸乙酯萃取,再经硅胶柱、凝胶柱和反相硅胶柱分离得到两种EGCG的甲基化衍生物,经HPLC检测其纯度分别为94%和97%,再经ESI-MS,MS/MS和1HNMR鉴定,确定其结构为EGCG4"Me和EGCG4’Me。通过单因素实验得出合成EGCG4"Me的较合适条件是:EGCG:硫酸二甲酯=1:1,适量NaHCO3,在丙酮溶液中,60℃水浴条件下回流反应5小时。利用高效液相色谱技术测定了EGCG4"Me和EGCG在人工模拟体胃液与肠液中的变化。结果表明,在人工模拟胃液中,EGCG4"Me脱去甲基,生成EGCG;而在人工模拟肠液中,EGCG4"Me由于甲基化,稳定性提高。同时,测定了EGCG4"Me和EGCG对DPPH·自由基的清除能力。得出在0.001～1mg/mL浓度范围内,EGCG4"Me对DPPH·自由基清除率与浓度均成正相关关系,EGCG4"Me的效果与EGCG的效果相当。实验中得到了高纯度的EGCG4"Me,可以为以后寻找高EGCG4"Me含量的茶树种质提供依据,并为其相关生物功能和产品开发提供了基础。