长白楤木根多糖的分离纯化及其体外抗氧化活性研究

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长白楤木(Aralia continentalis Kitagawa),又名草本刺嫩芽、东北土当归,五加科宿根草本植物,具有活血化瘀、止痛以及治疗腰膝酸痛等功效。多糖作为长白楤木重要的活性成分,具有抗氧化、抗衰老和抑菌等生物学活性。目前对于长白楤木多糖的系统分离纯化方法及其生物活性的构效关系研究较少,限制了长白楤木多糖的开发与应用。为了深入研究长白楤木多糖的组成及其生物活性,本论文具体研究结果如下:用水煮醇沉方法从长白楤木根中提取长白楤木根多糖WACP(R),经单因素实验优化的最佳提取条件为:提取时间2 h、提取温度100℃、固液比1:25 g/m L、提取2次,WACP(R)得率为3.85%。经测定,WACP(R)的总糖含量为68.5%,糖醛酸含量为30.2%,灰分含量为9.3%,蛋白质含量为0.68%。单糖组成分析表明,WACP(R)主要由半乳糖醛酸(Gal A)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)和阿拉伯糖(Ara)组成,此外还含有少量鼠李糖(Rha)。利用傅里叶红外光谱仪对WACP(R)进行特征官能团分析,结果表明,WACP(R)具有一般多糖的特征吸收峰。通过扫描电镜对WACP(R)微观形态进行分析,电镜下显示其结构呈片状或碎屑状堆积、大小不一,放大后表面高低不平,类似球形颗粒构成。采用DEAE-纤维素离子交换层析对WACP(R)进行分级,得到d H2O洗脱的长白楤木根中性糖级分WACP(R)-N和0.5 M Na Cl溶液洗脱的长白楤木根酸性糖级分WACP(R)-A,得率分别为40.25%和58.35%。采用Sephadex G-100凝胶柱对WACP(R)-N进行分离纯化,得到3个组分WACP(R)-N-a、WACP(R)-N-b和WACP(R)-N-c,得率分别为18.3%、27.8%和7.3%,分子量分析表明,WACP(R)-N-a相对均一,分子量为172.8KDa,WACP(R)-N-b含有部分杂质,分子量主要分布在7.0 KDa左右,WACP(R)-N-c为寡糖组分。采用Sepharose CL-6B凝胶柱对WACP(R)-A进行分离纯化,得到3个组分,WACP(R)-A-a、WACP(R)-A-b和WACP(R)-A-c,得率分别为7.1%、17.5%和75.3%,分子量分析表明,WACP(R)-A-a和WACP(R)-A-c相对均一,分子量分别为171.1 KDa和27.3 KDa,WACP(R)-A-b含有杂质,分子量主要分布在60.8 KDa左右。进一步,对其主要成分WACP(R)-A-c进行红外光谱、单糖组成和酶解分析,结果表明,WACP(R)-A-c主要是含有部分酯化的聚半乳糖醛酸(HG)型果胶。对WACP(R)、WACP(R)-A、WACP(R)-N进行了体外抗氧化活性研究。结果表明,WACP(R)和WACP(R)-A具有抗氧化活性,WACP(R)-N的抗氧化能力相对较弱。进一步以DPPH自由基清除能力为指标,考察WACP(R)-A不同级分的抗氧化活性,结果表明,WACP(R)-A-c对DPPH自由基清除率最高,推测WACP(R)-A-c是WACP(R)-A发挥抗氧化活性的主要组分。
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