肺癌发病率和死亡率在全球范围内均居恶性肿瘤的首位,我国每年有近60万人死于肺癌。目前临床治疗的三大手段几十年来一直未能明显降低死亡率。分子靶向治疗肿瘤,尤其已在临床应用中取得了令人瞩目的疗效,且毒副作用低而备受关注。实现分子靶向治疗的前提和关键是获得肿瘤细胞特异表达的功能性靶分子、靶基因。为此,本研究在前期已获得22株抗人肺癌单抗的基础上,进一步筛选鉴定能够抑制肺癌细胞恶性生物学行为,体内能有效治疗肺癌的功能性单抗,为肺癌的靶向治疗提供有应用价值的功能性单抗和分子靶标。本研究从前期研究获得的22株与人肺癌组织呈阳性反应,与正常组织反应阴性的特异性肺癌单抗中,选择了10株首先进行了一系列的生物学特性研究。采用活细胞和固定细胞免疫荧光技术检测了它们在3株肺癌细胞中的亚细胞定位。结果显示,其中9株单抗识别的抗原表达在癌细胞表面的细胞膜上,是抗肺癌膜蛋白的单抗,是抗体靶向治疗首选的单抗。应用免疫组化法检测这些单抗与肺癌组织反应的特异性,结果发现其中的4株与人肺癌组织反应的特异性最好。扩大病例数进行进一步鉴定检测,结果显示,4株单抗与人肺癌组织呈阳性反应的特异性达82.1-89.8%,检测阳性率达88.9-91.9%,表明其具有优良的靶向性。体外功能研究显示,4株单抗中的40E11能显著抑制肺癌细胞的增殖功能,抑制率达27.4%；另一株单抗24D4能显著抑制肺癌细胞的侵袭能力,其抑制率达40.0%,表明40E11和24D4是2株具有功能的单抗.。采用裸鼠体内共接种动物模型,检测40E11和24D4单抗在体内对肺癌生长的抑制干扰作用,结果表明40E11单抗对肺癌体内的生长速度、肿瘤体积及重量均有显著的抑制作用,抑制率达64.4%,但24D4单抗对肺癌生长的影响较小。为了进一步证明40E11单抗靶向治疗肺癌的疗效,我们从40E1]杂交瘤上清中纯化了大量高纯度抗体,在裸鼠体内进行了抗体靶向治疗的实验研究。结果表明40E11能显著地抑制干扰肺癌生长,其疗效可达68.2%,且与所用抗体剂量呈正相关,表明40E11单抗可作为靶向治疗肺癌的优良候选单抗。为了获得有靶向治疗价值的功能性单抗40E11识别的功能性靶抗原基因,首先采用Western blot在肺癌细胞蛋白中鉴定了该单抗识别的靶抗原分子量为130KD、95KD和70KD。应用亲和层析技术从肺癌细胞蛋白的PAGE胶电泳中,分离获得130KD、95KD和70KD的蛋白条带,经处理后,采用MALDI-TOP-PMF蛋白质谱技术进行分析鉴定,结果表明40E11单抗识别的抗原基因为H基因。生物信息学分析该该基因在肺癌中的功能和作用的研究国内外尚未有报道。为了进一步鉴定40E11单抗识别的是H基因,我们应用商业化H基因的抗体,采用双色免疫荧光及共聚焦显微镜分析,发现40E11和H抗体共定位于肺癌细胞膜上。在40E11单抗与H抗体的交叉免疫共沉淀实验中的结果证明,两种抗体识别的是同一种抗原基因分子H。采用siRNA敲降肺癌细胞中H基因后,检测H抗体和40E11抗体与被敲降了H基因的肺癌细胞的反应,结果发现两种抗体与肺癌细胞的反应均明显减低,在基因水平上再次证明40E11单抗分离的基因是H基因。为了研究H基因的功能,采用siRNA敲降肺癌细胞的H基因后,检测敲降后肺癌细胞的增殖、粘附、侵袭迁移等功能。结果显示,肺癌细胞的增殖速度明显减慢,抑制率达57.4%,这一结果与40E11单抗在蛋白水平检测结果一致；同时肺癌细胞与细胞外基质matrigel的粘附能力也明显下降,抑制率为20.1%；而侵袭及迁移功能未见受影响。流式细胞技术检测细胞周期发现肺癌细胞生长周期发生G2期的阻滞,这可能就是H基因被敲降或抗体作用后肺癌细胞增殖显著减慢的重要机制。以上这些研究结果不仅为肺癌的靶向治疗提供了有应用价值的候选单抗药物,也为肺癌的分子靶向治疗提供了有广阔应用前景的分子靶标H抗原基因。