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本文以药用植物绞股蓝为研究对象,研究其多糖的提取、纯化、表征结构及咀嚼片的研制,主要研究内容与结论如下:
1.分别采用水提醇沉法、微波辅助水提取法、超声波提取法、酶解辅助水提取法四种方法提取绞股蓝多糖,并对四种提取工艺进行优化,得出最优方案为超声波辅助水提法,条件为超声波时间52min、超声波功率129W、超声波温度100℃、料液比1:47g/mL。在此条件下,实际浸提率为3.24%(w/w);其次为酶解辅助水提法,条件为加酶量占底物质量0.41%(w/w)、料液比1:38g/mL、酶解温度44℃、pH6.2,最佳条件下,实际浸提率为2.78%(w/w)。
2.用木瓜蛋白酶+Sevage法脱蛋白,H2O2脱色,乙醇沉淀得到绞股蓝粗多糖,粗多糖经Sephadex-G100凝胶柱层析进一步分离纯化,透析脱盐,乙醇沉淀得到两个主要多糖组分:GPP-1和GPP-2。GPP-2多糖经Sephadex-G100凝胶层析检测显示单一对称峰,紫外260nm和280nm扫描没有吸收峰,证明GPP-2是不再含蛋白、核酸的均一组分。
3.通过薄层层析和HPLC分析GPP-2多糖中的单糖组成和摩尔比.研究发现GPP-2由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖醛酸、阿拉伯糖和半乳糖组成,其分子物质的量之比为甘露糖:鼠李糖:半乳糖醛酸:葡萄糖:半乳糖:阿拉伯糖=0.92:2.94:9.08:76.12:5.97:5.51。红外光谱显示,在1451cm-1,2924cm-1,3371cm-1均有多糖特征吸收峰,并存在呋喃结构。通过核磁共振图谱的解析,1HNMR表明GPP-2有6种单糖组成。通过电子显微镜对GPP-2的形态观察,发现其呈棒状颗粒结构。
4.根据绞股蓝多糖最佳水提取工艺,获得绞股蓝多糖浸膏,使其干燥,粉碎过筛,按照优选的处方制备,得到绞股蓝多糖咀嚼片。