论文部分内容阅读
目的:1.明确藤黄酸杀伤胰腺癌细胞的作用。2.探讨藤黄酸能否促进胰腺癌细胞的化疗敏感性,并研究其作用机制。3.探讨藤黄酸能否促进胰腺癌细胞发生自噬,并且明确其诱导的自噬在胰腺癌中的性质。方法:1.通过MTT、细胞周期和细胞凋亡实验证明藤黄酸抑制胰腺癌细胞的生长。2.联合藤黄酸和吉西他滨对胰腺癌细胞进行处理;通过MTT和细胞凋亡实验分析藤黄酸能否促进胰腺癌细胞对吉西他滨的化疗敏感性;使用q-PCR和Western-Blot实验分析藤黄酸对耐药基因RRM1和RRM2的表达影响;最后通过构建裸鼠皮下移植瘤模型观察藤黄酸联合吉西他滨对胰腺癌的抑制效果。3.通过Western-Blot、吖啶橙染色和透射电镜观察藤黄酸能否促进胰腺癌细胞发生自噬;通过转染GFP/RFP-LC3-Ⅱ慢病毒载体进入胰腺癌细胞,观察胰腺癌细胞内自噬流的发生;通过使用自噬抑制剂氯喹、3-MA或Si-Atg7转染抑制胰腺癌细胞自噬,观察自噬对藤黄酸抗胰腺癌细胞的影响,明确藤黄酸和自噬在胰腺癌中的关系;最后使用构建裸鼠皮下移植瘤模型对体外实验进行验证。结果:1.结果显示藤黄酸可以有效抑制胰腺癌细胞的增殖,抑制细胞周期,促进细胞凋亡;2.结果显示藤黄酸可以增加吉西他滨杀伤胰腺癌细胞的能力。Western-Blot结果显示藤黄酸可以同时抑制ERK和AKT蛋白的磷酸化,并且抑制了RRM2的表达,但对RRM1的表达抑制不明显。另外,藤黄酸可以抑制转录因子E2F1的表达,通过下调E2F1可以抑制RRM2的表达。动物实验结果显示藤黄酸联合吉西他滨可以协同抑制裸鼠胰腺癌皮下移植瘤的生长。3.结果显示藤黄酸促进了胰腺癌细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达,抑制p62的表达,并且促进了细胞自噬小体、嗜酸性小体以及自噬流的形成。另外,抑制自噬可以增加藤黄酸对胰腺癌细胞杀伤作用,并且同时使用藤黄酸和氯喹可以通过促进胰腺癌细胞内ROS的积累诱导细胞凋亡。动物实验结果显示联合氯喹和藤黄酸可以协同抑制裸鼠皮下移植瘤的生长。结论:1.藤黄酸可以有效抑制胰腺癌细胞的生长。2.藤黄酸可以通过抑制耐药基因RRM2的表达增加胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性。3.藤黄酸可以诱导胰腺癌细胞发生保护性自噬,抑制自噬可以增加胰腺癌细胞对藤黄酸的敏感性,并且联合氯喹和藤黄酸可以通过ROS的积累有效抑制胰腺癌的生长。