论文部分内容阅读
目的：银屑病(psoriasis)是严重影响人类身心健康的自身免疫性皮肤病。导致银屑病表皮细胞过度增殖和异常分化的确切原因尚未确定。miRNAs是内源性非蛋白编码单链小分子RNAs，主要功能为转录后水平抑制靶基因的表达。miRNAs对其靶基因的调节障碍可导致不同疾病的发生。miR-203具有高度皮肤特异性，在银屑病皮损中异常表达，有报道推测p63和SOCS3是其进化保守的靶基因。miR-203对p63和SOCS3的调节及其在角质形成细胞增殖、分化和银屑病发病机制中的作用尚不明确。STAT3和Notch信号通路在银屑病的发病中起着关键的作用，而p63和SOCS3是上述信号通路的2个重要调节子。本研究旨在通过将miR-203的模拟物和其抑制物转染人永生化角质形成细胞HaCaT细胞系，确定其对p63和SOCS3的调控机制、明确其与STAT3和Notch信号通路的关系及其在银屑病发病机制中的作用，确定它们的调控方式和相互关系，为其作为银屑病新的治疗靶标提供理论依据。方法：用miR-203的模拟物和抑制物(miR-203mimic和miR-203inhibitor)定量转染人角质形成细胞系HaCaT细胞。通过qRT-PCR、Western blot、流式细胞术方法检测p63、SOCS3、p-STAT3和Notch1基因及蛋白的表达水平；并用含TNF-α (20ng/ml)和IL-6(20ng/ml)的培养液处理HaCaT细胞，并以qRT-PCR法对miR-203的表达水平进行检测，观察细胞因子TNF-α和IL-6对miR-203表达水平的影响。结果：1. qRT-PCR检测p63、SOCS3、p-STAT3、Notch1的mRNA表达水平，其中转染miR-203mimic组与对照组相比SOCS3、Notch1、p-STAT3的mRNA表达上调，Notch1组间差异具有显著性(P <0.05)，p63mRNA表达水平无明显变化；转染miR-203inhibitor组与对照组相比SOCS3、Notch1、p-STAT3的mRNA表达下调，SOCS3和Notch1组间差异有显著性(P <0.05)，p63mRNA表达亦无明显变化。2. Western blot和流式细胞术方法检测蛋白表达，转染miR-203mimic的细胞，p63和SOCS3表达下降，p-STAT3和Notch1表达升高;转染miR-203inhibitor的细胞结果与之相反。3. HaCaT细胞经TNF-α和IL-6处理后，经qRT-PCR方法检测miR-203表达升高，差异具有显著性(P <0.05)。结论：miR-203的过表达，可以抑制p63和SOCS3表达，从而使STAT3持续激活，STAT3的磷酸化水平增加，导致角质形成细胞过度增殖。本研究为探讨miR-203对p63、SOCS3的调控机制及其与STAT3信号转导通路的关系提供了初步的实验基础，有助于了解miR-203在银屑病发病机制中的作用。