背景：2型糖尿病(T2DM)占整个糖尿病人群的90%以上,是目前最主要和增长最快的糖尿病类型,其发病基础表现为胰岛素抵抗与糖脂代谢紊乱。近年来虽然在糖尿病发病机制及临床治疗上均取得了较多研究成果,但2型糖尿病的发病机制尚不清楚,临床上也没有根治糖尿病的手段。microRNAs(miRNA)是普遍存在于真核细胞中的一种大小约21-25个核苷酸的单链非编码小分子RNA,通过特异性识别并结合靶基因信使RNA的3’端非翻译区,使其降解或抑制翻译,从而参与转录后基因调控,对许多重要的细胞活动起到调节作用。miR-21是由约22个核苷酸组成的非编码小分子RNA,研究表明miR-21参与了诸多重要的细胞代谢活动,并与肿瘤的发生密切相关,在糖尿病肾病及胰岛素耐受中也扮演着重要的角色。研究发现miR-21在2型糖尿病小鼠肝脏中的表达下调,但其对糖尿病状态下糖脂代谢的调控作用及调控机制尚未见报道。PI3K/Akt途径是胰岛素主要信号传导途径,与胰岛素抵抗的发生紧密相关,发生胰岛素抵抗时PI3K/Akt通路活性降低。PTEN是第一个被发现具有磷酸酶功能的抑癌基因,也是一个有效的PI3K/Akt通路负调节因子。本论文的研究目的在于分析miR-21与PTEN蛋白表达的相关性,并初步探讨miR-21是否通过作用PTEN起到调控胰岛素敏感性的作用,为研究2型糖尿病潜在靶点提供理论依据。方法：利用分子克隆方法克隆出PTEN的3’-UTR,与报告质粒酶切连接,构建双报告基因系统,与miR-21模拟物或miR-21抑制剂分别转染细胞,24到48h后检测荧光值,通过荧光值的变化验证PTEN是否是miR-21的作用靶点。构建miR-21腺病毒过表达载体,转染Huh7细胞,采用茎环实时荧光逆转录聚合酶链反应(stem-loop real-time RT-PCR)检测样本中PTEN mRNA的表达情况,采用western blot检测PTEN蛋白表达情况。结果与结论：1.重组报告质粒与miR-21模拟物共转染293a细胞后,可以有效抑制GFP荧光活性,抑制率达到50%。而对PTEN3’-UTR突变后重组的报告质粒与模拟物共转染后,并未显示出这种效应。结果表明,PTEN-3’UTR可能是miR-21的作用靶点。2.与对照组比较,miR-21过表达腺病毒载体转染Huh7细胞后,PTEN mRNA的表达量并无明显变化,而western blot检测到PTEN的蛋白表达量明显降低。结果表明miR-21与PTEN蛋白表达呈负相关。3.早期研究表明PTEN作为PI3K/Akt通路负调节因子对机体胰岛素抵抗起到调节作用,我们的研究结果表明,miR-21可能通过直接靶作用于PTEN,对胰岛素抵抗起到调节效应。