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目的:观察“补肾活血”法治疗糖尿病肾病的临床疗效以及探究黄芪甲苷对1型糖尿病STZ小鼠肾脏保护的机制,为“补肾活血”法治疗糖尿病肾病(Diabetic Kidney Disease,DKD)提供临床依据,为中医药防治提供新的证据。方法:临床研究:将符合糖尿病肾病Ⅲ-Ⅴ期诊断标准患者随机分为观察组和对照组,各30例。观察组采用西医对症治疗+自拟“补肾活血方”;对照组采用西医对症治疗+院内制剂“滋肾降糖丸”。治疗前后详细记录患者的临床症候积分(主要观察指标)、24小时尿蛋白定量、血肌酐、糖化血红蛋白、空腹血糖,统计两组患者总有效率,统计分析“补肾活血”法治疗DKD的安全性和有效性。动物实验研究:C57BL/6J小鼠适应性喂养后进行造模。糖尿病模型组:一次性腹腔注射STZ溶液,造模成功后,随机分成1型糖尿病模型组(STZ组,n=6)、AS-Ⅳ治疗组(STZ+AS-Ⅳ组,n=6)。正常对照组(Control组,n=6):一次性腹腔注射等体积柠檬酸缓冲液。STZ组和Control组喂养正常标准饲料,STZ+AS-Ⅳ组予AS-Ⅳ药物饲料喂养(按5g:1kg比例将AS-Ⅳ和标准饲料混匀),共计观察8周。第8周时,采集小鼠24h尿液、血清及肾脏样本;检测尿白蛋白、尿NAG、空腹血糖及血肌酐;免疫组化染色鉴别肾中catalase的表达位置;Western blot方法检测肾组织和线粒体中catalase、OPA1、VDAC、TFAM的蛋白含量。qPCR方法测定肾线粒体拷贝数。结果:临床研究:疗程共计8周。治疗前,统计学分析两组患者的临床症候积分、24小时尿蛋白定量、血肌酐、糖化血红蛋白、空腹血糖,均无明显差异,说明具有可比性。治疗后,两组临床症候积分、24小时尿蛋白定量均较前显著降低,且观察组优于对照组;糖化血红蛋白、空腹血糖、血肌酐较治疗前有所改善,但两组之间无明显差异。动物实验研究:第8周时,STZ组24h尿白蛋白排泄率、尿NAG明显高于Control组,AS-Ⅳ干预8周后,STZ+AS-Ⅳ组上述指标较STZ组明显降低。与STZ组相比,Control组血肌酐有所升高,但无明显差异,STZ+AS-Ⅳ组血肌酐明显降低。STZ组小鼠体重较Control组明显减轻,较STZ+AS-Ⅳ组体重无明显差异。STZ组肾小管面积较Control组稍有增加,但无统计学意义,STZ+AS-Ⅳ组较STZ组肾小管面积明显降低。肾PAS染色结果提示STZ组肾小管面积较Control组有所增大,AS-Ⅳ干预后明显改善该病理变化。免疫组化染色提示catalase主要在肾小管表达。Western blot结果表明STZ组肾组织和肾线粒体中catalase较Control组均明显减少,AS-Ⅳ治疗8周后肾组织catalase变化不明显,而线粒体中catalase显著增加。肾组织中,STZ组OPA1、VDAC较Control组明显减少,AS-Ⅳ干预8周后其蛋白表达明显增加。肾线粒体中,OPA1、VDAC表达无明显差异。STZ组TFAM表达量较Control组明显增加,较STZ+AS-Ⅳ组无明显差异。实时荧光定量PCR结果表明STZ组线粒体拷贝数较Control组明显减少,AS-Ⅳ治疗后有少许升高,但无明显统计学意义。结论:临床研究:“补肾活血”法治疗糖尿病肾病Ⅲ-Ⅴ期患者的疗效明显优于院内制剂“滋肾降糖丸”,为中医药在糖尿病肾病治疗领域提供充分循证医学证据,值得深入研究。动物实验研究:研究证明黄芪甲苷可能通过增加肾线粒体catalase以及肾组织OPA1和VDAC蛋白合成来调节肾线粒体功能,从而起到肾脏保护作用,这为中医药防治DKD提供了新的证据。