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目的:
1.探究高浓度葡萄糖能否诱导人的晶状体上皮细胞(lensepithelialcells,LECs)细胞发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT),及马齿苋多糖对于高糖诱导的LECs发生EMT这一过程是否具有抑制作用。
2.探究高浓度葡萄糖是否能引起EMT相关信号通路intergrinβ1-FAK的活化,及马齿苋多糖能否抑制该通路的活化。
方法:
1.将LECsSRA01/04细胞系分为3组,分别培养在低浓度葡萄糖(5.5mmol/LDMEM)培养基、高浓度葡萄糖(30mmol/LDMEM)培养基和施加了马齿苋多糖的高浓度葡萄糖(30mmol/LDMEM)培养基中48h,于培养的0h、6h、12h、24h、48h在倒置显微镜下分别观察3组细胞的形态学变化。以低糖组细胞为对照组,观察高糖组与马齿苋多糖组细胞与对照组相比是否发生了形态学改变,拍照并记录。
2.选取EMT相关标志物:上皮标志物E-cadherin、ZO-1和间质标志物Vimentin、α-SMA及EMT相关信号通路:intergrinβ1-FAK信号通路,采用WesternBlot(蛋白质免疫印迹法)和qRT-PCR(Real-timeQuantitativePolymeraseChainReaction,实时定量聚合酶链反应)技术,检测以上指标在3组细胞中蛋白和基因的表达差异与信号通路的活化情况,记录检测结果。
结果:
1.细胞形态学结果显示:随着时间的延长,对照组细胞数量不断增加,但没有明显的形态学改变;而高糖组细胞随着时间改变逐渐变长呈长梭形,细胞数量也逐渐减少;而马齿苋多糖组细胞与对照组细胞在各个时间段的形态和数量基本趋于一致,没有明显的长梭形改变。
2.WesternBlot和qRT-PCR检测结果均显示:与对照组相比,高糖组的上皮标志物ZO-1、E-cadherin基因与蛋白表达量均显著下调,而马齿苋多糖组虽较对照组表达有所下调,但均显著高于高糖组;与对照组相比,高糖组的间质标志物α-SMA、Vimentin基因与蛋白表达量均显著上调,而马齿苋多糖组虽较对照组表达上调,但均显著低于高糖组;高糖组的intergrinβ1-FAK基因与蛋白表达量与对照组相比表达活跃,而马齿苋多糖组与高糖组相比表达显著下调。
结论:
1.高浓度葡萄糖诱导了LECs发生EMT,而马齿苋多糖的参与部分抑制了高糖作用下的LECs发生EMT。
2.intergrinβ1-FAK信号通路参与了EMT的发生。
3.高浓度葡萄糖引起intergrinβ1-FAK信号通路活化,马齿苋多糖部分抑制了该通路的活化。
1.探究高浓度葡萄糖能否诱导人的晶状体上皮细胞(lensepithelialcells,LECs)细胞发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT),及马齿苋多糖对于高糖诱导的LECs发生EMT这一过程是否具有抑制作用。
2.探究高浓度葡萄糖是否能引起EMT相关信号通路intergrinβ1-FAK的活化,及马齿苋多糖能否抑制该通路的活化。
方法:
1.将LECsSRA01/04细胞系分为3组,分别培养在低浓度葡萄糖(5.5mmol/LDMEM)培养基、高浓度葡萄糖(30mmol/LDMEM)培养基和施加了马齿苋多糖的高浓度葡萄糖(30mmol/LDMEM)培养基中48h,于培养的0h、6h、12h、24h、48h在倒置显微镜下分别观察3组细胞的形态学变化。以低糖组细胞为对照组,观察高糖组与马齿苋多糖组细胞与对照组相比是否发生了形态学改变,拍照并记录。
2.选取EMT相关标志物:上皮标志物E-cadherin、ZO-1和间质标志物Vimentin、α-SMA及EMT相关信号通路:intergrinβ1-FAK信号通路,采用WesternBlot(蛋白质免疫印迹法)和qRT-PCR(Real-timeQuantitativePolymeraseChainReaction,实时定量聚合酶链反应)技术,检测以上指标在3组细胞中蛋白和基因的表达差异与信号通路的活化情况,记录检测结果。
结果:
1.细胞形态学结果显示:随着时间的延长,对照组细胞数量不断增加,但没有明显的形态学改变;而高糖组细胞随着时间改变逐渐变长呈长梭形,细胞数量也逐渐减少;而马齿苋多糖组细胞与对照组细胞在各个时间段的形态和数量基本趋于一致,没有明显的长梭形改变。
2.WesternBlot和qRT-PCR检测结果均显示:与对照组相比,高糖组的上皮标志物ZO-1、E-cadherin基因与蛋白表达量均显著下调,而马齿苋多糖组虽较对照组表达有所下调,但均显著高于高糖组;与对照组相比,高糖组的间质标志物α-SMA、Vimentin基因与蛋白表达量均显著上调,而马齿苋多糖组虽较对照组表达上调,但均显著低于高糖组;高糖组的intergrinβ1-FAK基因与蛋白表达量与对照组相比表达活跃,而马齿苋多糖组与高糖组相比表达显著下调。
结论:
1.高浓度葡萄糖诱导了LECs发生EMT,而马齿苋多糖的参与部分抑制了高糖作用下的LECs发生EMT。
2.intergrinβ1-FAK信号通路参与了EMT的发生。
3.高浓度葡萄糖引起intergrinβ1-FAK信号通路活化,马齿苋多糖部分抑制了该通路的活化。