论文部分内容阅读
葡萄叶是一种传统中药材,叮治呕吐、水肿、小便不利、日赤等症。本文以赤霞珠葡萄(Cabernet Sauvignon)叶为试验材料,研究了赤霞珠葡萄叶中总黄酮的提取、分离纯化及体外抗氧化活性作用,主要实验结果如下:1.采用响应面法优化了赤霞珠葡萄叶中总黄酮的提取工艺,其最佳提取条件为:乙醇的浓度为56%,液料比为40:1(mL·g-1),提取时间为2.1h,提取温度为80℃,在最佳工艺条件下赤霞珠葡萄叶中总黄酮的提取率为5.61%。验证试验结果表明该提取工艺稳定性好,总黄酮提取率较高。2.采用大孔树脂对赤霞珠葡萄叶乙醇提取物进行分离纯化,并根据六种大孔树脂的静态吸附解吸和动态吸附解吸效果,发现D-113树脂的综合性能较佳。D-113大孔树脂纯化赤霞珠葡萄叶总黄酮的最佳工艺参数为:上样液浓度为2.66mg/mL,pH值为5,洗脱流速为2mL/min,用70%乙醇溶液进行洗脱。在此条件下,纯化后的赤霞珠葡萄叶总黄酮纯度可由原来的22.16%提高到48.83%,纯化效果良好,为赤霞珠葡萄叶总黄酮的进一步分离纯化提供了理论依据。3.通过对赤霞珠葡萄叶正丁醇提取物进行分离,经反复硅胶柱层析,得到2个单体化合物。结合理化性质,经结构鉴定为山奈酚、巴马汀。4.采用清除DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基的能力以及还原力对赤霞珠葡萄叶不同溶剂萃取物的抗氧化能力进行了综合评价。研究表明:赤霞珠葡萄叶不同溶剂萃取物的抗氧化活性存在较大差异,但都是随着浓度的增加而抗氧化能力增强。在四种评价体系中,70%乙醇洗脱物和乙酸乙酯萃取物具有较强的抗氧化能力,其清除DPPH·、O2-·的IC50值分别为(0.017±0.001)、(0.023±0.001)、(0.174±0.007)和(0.222±0.003) mg/mL,且清除能力高于化学抗氧化剂BHT。通过对不同溶剂萃取物中总黄酮和总酚含量与抗氧化活性的相关性研究,结果表明:总黄酮含量与萃取物清除ABTS自由基、清除DPPH自由基、超氧阴离子自由基以及还原力具有极显著性(P<0.01)。由于70%乙醇纯化样洗脱物和乙酸乙酯萃取物的总黄酮含量较高、活性较强,因此可以选择总黄酮含量作为赤霞珠葡萄叶抗氧化提取物质量评价的指标。