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目的研究加味二陈汤对A549荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用,探讨加味二陈汤对ATF4-CHOP通路的调控作用方法1.动物实验:将培养好的A549人肺腺癌细胞接种于Balbc裸鼠右侧腋部皮下,待裸鼠皮下肿瘤可触及后,将裸鼠随机分为3组(中药高剂量组、中药低剂量组、空白对照组),每组8只。2.中药高剂量组以加味二陈汤0.4ml/天灌胃21天(24g/kg/天,每ml含原药1.2g),中药低剂量组以加味二陈汤0.4ml/天灌胃21天(12g/kg/天,每ml含原药0.6g),对照组以0.4ml生理盐水灌胃,每天一次,连续21天。给药后观察各组裸鼠一般情况,第1、5、9、13、17、21天测量小鼠体重和肿瘤长径(a)、短径(b),计算肿瘤体积(V=1/2*a*b~2),分析各组肿瘤体积变化,绘制肿瘤生长曲线。给药21天后处死裸鼠,测量瘤重,计算各组抑瘤率。Western Blot检测各组肿瘤组织中ATF4、CHOP蛋白表达,TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡情况。3.体外实验:将20只SD大鼠随机分为空白对照组和中药组(每组10只),对照组以2ml生理盐水灌胃,早晚各一次;中药组以2ml加味二陈汤灌胃(每ml含生药2.2g),早晚各一次,连续灌胃3天。末次给药一小时后,腹主动脉取血,制备空白血清和含药血清。分别以加味二陈汤10%含药血清、加味二陈汤20%含药血清及20%空白血清培养A549肺癌细胞,培养24h和48h后采用CCK-8检测肿瘤细胞增殖。RT-PCR检测血清培养24h后各组A549细胞ATF4、CHOP mRNA水平。结果1.给药21天后,空白对照组平均肿瘤体积1360.8mm~3,中药低剂量组平均肿瘤体积1061.7 mm~3,中药高剂量组平均肿瘤体积836.7 mm~3。与空白对照组相比,使用加味二陈汤后两组肿瘤体积均减小,高剂量加味二陈汤能显著抑制肿瘤生长,有统计学差异(P<0.05)。空白对照组平均瘤重0.79g,加味二陈汤低剂量组平均瘤重0.67g,加味二陈汤高剂量组平均瘤重0.63g;与空白对照组相比,使用加味二陈汤后两组瘤重均减轻,高剂量加味二陈汤能显著减轻瘤重(P<0.05)。加味二陈汤高剂量组抑瘤率(20.3%),加味二陈汤低剂量组抑瘤率(15.2%)。空白对照组裸鼠体重较加味二陈汤两组低,各组裸鼠体重无明显差异。2.TUNEL检验提示,对照组肿瘤细胞凋亡率35%,中药低剂量组细胞凋亡率45%;中药高剂量肿瘤细胞凋亡率61%,使用加味二陈汤干预后,两组细胞凋亡率均显著上升,有统计学差异(P均<0.01)。Western Blot检测各组ATF4、CHOP蛋白表达,与对照组比较,加味二陈汤两组ATF4、CHOP表达均上调,高剂量组上调更明显(P<0.01)。3.细胞实验:CCK-8检测细胞增殖,与20%空白血清对比,加味二陈汤10%、20%含药血清分别培养A549细胞24h、48h后,细胞增殖均被显著抑制(P均<0.01),其抑制能力与剂量存在正相关性。RT-PCR检测提示10%含药血清、20%含药血清培养后,与空白血清对比,加味二陈汤两组ATF4、CHOP RNA表达均上调,20%含药血清上调更明显(P均<0.01)。结论加味二陈汤能抑制A549肺癌荷瘤裸鼠肿瘤生长,诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与上调ATF4、CHOP蛋白所导致的内质网应激有关。