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研究背景和目的:结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一。世界范围内其发病率、死亡率居所有恶性肿瘤的第3位。近年亚洲国家结肠癌发病率呈明显上升趋势。我国最新的肿瘤流行病学数据显示其发病率居第4位,死亡率居第5位。左右半结肠癌生物学行为的不同很早就被临床所关注。1990年Bufill等学者首次提出左半结肠癌(LCC)和右半结肠癌(RCC)是两种不同肿瘤,在解剖结构生理功能、临床病理特征、致癌机制等方面阐明了两者差异。EGFR是经过临床证实的跟结直肠癌密切相关的治疗靶点,用于结肠癌精准治疗。KRAS基因是EGFR信号通路中一个重要调控基因,突变时会使结肠癌患者对抗EGFR抗体类药物产生耐药。2016版NCCN明确规定:一、所有结肠癌患者都应该检测Kras基因状态;二、Kras基因野生型患者才建议使用EGFR抑制剂进行治疗。因此KRAS基因突变检测是目前筛选抗EGFR靶向药物治最有效最直接的方法。左右半结肠癌临床病理特征及与KRAS基因相关性分析,国内报道不一致,大都来自非随机的,小样本的回顾性研究,本研究意在揭示不同部位结肠癌的肿瘤生物学差异,尤其分子水平,为实现肿瘤个体化治疗及精准治疗提供理论依据。精准治疗的基础在于准确的检测结果。目前国内尚有实验室未开展该检测,已开展该检测科室采取方法并未完全统一.检测方法不同导致检测结果不一致,影响临床治疗及今后的研究。本文亦将对Sanger DNA测序法,、ARMS两种方法分析对比,以期为临床实验室KRAS基因突变规范性检测提供理论依据。研究方法:收集南方医科大学南方医院病理科2013-2016年间普外科接受手术治疗的236例结肠癌患者的临床病理资料:发病部位、临床病理诊断、性别、年龄、是否伴有腹痛、是否有肛周出血/大便潜血、肿瘤大小、肿瘤分化程度、TNM分期,最终选定198例标本统计分析。随机选取113例标本应用Sanger DNA测序法检测KRAS基因突变,对左右半结肠癌中KRAS基因突变类型、KRAS基因突变与临床病理特征相关性进行统计分析。再应用ARMS法对上述113例标本进行KRAS基因突变检测,统计分析两种方法学差异。统计软件为SPSS Statitics 20.0,采用卡方检验分析差异性,P<0.05为差异有统计学意义;采用Kappa 一致性检验分析两种检测方法一致性,Kappa≥0.75,说明一致性较好;0.4≤Kappa<0.75,说明一致性一般;Kappa<0.4,说明一致性较差。研究结果:1.左右半结肠癌临床病理特征与KRAS基因突变相关性(1)左右半结肠癌临床病理特征:肿瘤部位与患者的性别、年龄、大小、分化程度、是否肛周出血/大便潜血及M分期密切相关(P<0.05);结肠癌患者肿瘤原发部位与患者腹痛与否、T分期及N分期无相关性(P≥0.05)。(2)KRAS基因突变类型特征:113例结肠癌患者中,KRAS基因总突变率为34.5%(39/113)。其中 RCC 总突变率为 52.6%(20/38),明显高于 LCC25.3%(19/75)的突变率(P<0.05)。KRAS基因第12位密码子GLY12ASP(GGT>GAT)突变位点突变率在 RCC 为 26.3%(10/38),高于 LCC8.0%(6/75)的突变率(P<0.05)。其余四个位点突变率,结果显示并无相关性(P≥0.05)。检测到一例标本有GLY12ASP(GGT>GAT)和 GLY13ASP(GGC>GAC)双突变。(3)KRAS基因突变与临床病理相关性:113例标本KRAS基因突变率与肿瘤原发灶部位、分化程度、N分期密切相关(P<0.05);KRAS基因突变率与性别,年龄,肿瘤大小,T分期以及M分期无相关性(P≥0.05)。2.比较ARMS法和Sanger DNA测序法检测结肠癌KRAS基因突变:(1)总体突变率:ARMS法和Sanger DNA测序法突变率分别为47.8%(54/113)、34.5%(39/113),前者突变率显著高于后者,差异有统计学意义(P<0.05);两法检测结果经Kappa一致性检验,Kappa=0.679(0.4≤Kappa<0.75),表明一致性一般。(2)单碱基突变类型:ARMS 法检测到 GLY12ASP、GLY12ALA、GLY12VAL、GLY13ASP4种类型,Sanger DNA测序法检测到上述4种及GLY12CYS5种类型,ARMS法测到4种单碱基的突变率与Sanger DNA测序法此4种单碱基的突变率无相关性。(P≥0.05)。另有Sanger DNA测序法法能检测到4例GLY12CYS突变,ARMS法未检测到;有19例标本ARMS法检测结果阳性,Sanger DNA测序法检测结果阴性;一例标本用Sanger DNA测序法检测到GLY12ASP(GGT>GAT)和GLY13 ASP(GGC>GAC)双突变。结论:1.左右半结肠癌临床病理特征与KRAS基因突变相关性:左右半结肠癌在病理学特性方面截然不同,且与KRAS基因突变密切相关,因此,两者的治疗方案,治疗敏感性也不相同。鉴于此,RCC和LCC在诊断和治疗过程需要区别对待。2.ARMS法和Sanger DNA测序法各有优缺点,ARMS法能检测出的阳性病例更多,结果差异显著;Sanger DNA测序法能检测ARMS试剂盒未能检测突变位点。两法检测结果一致性较为理想。结合FDA批准方案,临床可首选ARMS法,对未能检测出突变位点,采取两种方法互补的复合检测方法,完善KRAS基因突变检出率。