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目的
探讨丹酚酸A(Sal A)对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其分子机制，利用体外糖氧剥夺(OGD)模型和体内大脑中动脉缺血再灌注模型(MCA-IR)，研究SalA对Akt信号通路和胞浆型磷脂酶A2表达的影响，阐明SalA通过Akt信号通路调控胞浆型磷脂酶A2表达的分子机制。
方法
(1)采用线拴法构建大脑中动脉缺血再灌注(MCA-IR)模型。将正常SD大鼠随机分为假手术组(对照组)、MCA-IR组、SalA+MCA-IR组(SalA组)，LY294002+丹酚酸A组。经干预后，采用TUNEL法检测脑细胞凋亡，Westernblot检测磷酸化Akt(p-Akt)和Akt的表达，免疫组织化学法检测海马区胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)的表达。
(2)以星形胶质细胞建立OGD模型，NAC作为阳性对照，并将分为空白对照组、OGD组、丹酚酸A组(分为低剂量组、中剂量组和高剂量组)、SalA+Akt特异性抑制剂MK-2206组(简称SalA+MK-2206组)、NAC组和NAC+MK-2206组(简称NAC+MK-2206组)。经干预后，采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率、流式细胞仪技术分析细胞凋亡比例和ROS含量，总超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒和脂质氧化检测试剂盒检测细胞内SOD活性和丙二醛(MDA)含量，蛋白免疫印迹法检测细胞内Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、mTORC1、磷酸化mTORC1(p-mTORC1)、胞浆型磷脂酶A2(cLPA2)、Cleaved-Caspase3及Bcl-2的表达水平。
结果
(1)与对照组相比，MCA-IR组行为学评分、SOD活性、p-Akt表达降低，梗死面积、含水量、海马CA1区细胞凋亡率、MDA含量和cPLA2表达均明显增加；1.0、2.5、5.0mg/kgSalA预处理后，与MCA-IR组相比，SalA组行为学评分、SOD活性、p-Akt表达增加，梗死面积、含水量、海马CA1区细胞凋亡率、MDA含量和cPLA2表达降低(P＜0.05)。与对照组相比，MCA-IR组再灌注8、24、48h后，细胞凋亡率、cPLA2表达增加，p-Akt表达下降。与MCA-IR组相比，SalA组细胞凋亡率、cPLA2表达降低，p-Akt表达增加。与SalA组相比，LY294002+SalA组，细胞凋亡率、cPLA2表达增加，p-Akt表达下降。
(2)与对照组相比，OGD组细胞存活率、SOD活性、p-AKT、p-mTORC1、Bcl-2表达明显降低、细胞凋亡率、MDA含量、ROS含量、cPLA2、Cleaved-Caspase3表达明显增加。与OGD组相比，Sal组和NAC组细胞存活率、SOD活性、p-AKT、p-mTORC1、Bcl-2表达明显增加、细胞凋亡率、MDA含量、ROS含量、cPLA2、Cleaved-Caspase3表达明显降低。与SalA组相比，SalA+MK-2206组细胞存活率、SOD活性、p-Akt、p-mTORC1、Bcl-2表达明显降低、细胞凋亡率、MDA含量、ROS含量、cPLA2、Cleaved-Caspase3表达明显增加，NAC组无明显差异。与NAC组相比，SalA+MK-2206组细胞存活率、SOD活性、p-AKT、p-mTORC1、Bcl-2表达明显降低、细胞凋亡率、MDA含量、ROS含量、cPLA2、Cleaved-Caspase3表达明显增加。
结论
(1)SalA具有降低缺血再灌注损伤后细胞凋亡，发挥保护作用。
(2)SalA通过增加p-Akt表达，激活Akt信号通路，降低cPLA2表达，抑制缺血再灌注损伤后脑组织损伤。
(3)SalA清除细胞内氧自由基，缓解OGD诱导Akt信号通路抑制作用，降低cPLA2表达,减少脑细胞凋亡，发挥细胞保护作用。
探讨丹酚酸A(Sal A)对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其分子机制，利用体外糖氧剥夺(OGD)模型和体内大脑中动脉缺血再灌注模型(MCA-IR)，研究SalA对Akt信号通路和胞浆型磷脂酶A2表达的影响，阐明SalA通过Akt信号通路调控胞浆型磷脂酶A2表达的分子机制。
方法
(1)采用线拴法构建大脑中动脉缺血再灌注(MCA-IR)模型。将正常SD大鼠随机分为假手术组(对照组)、MCA-IR组、SalA+MCA-IR组(SalA组)，LY294002+丹酚酸A组。经干预后，采用TUNEL法检测脑细胞凋亡，Westernblot检测磷酸化Akt(p-Akt)和Akt的表达，免疫组织化学法检测海马区胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)的表达。
(2)以星形胶质细胞建立OGD模型，NAC作为阳性对照，并将分为空白对照组、OGD组、丹酚酸A组(分为低剂量组、中剂量组和高剂量组)、SalA+Akt特异性抑制剂MK-2206组(简称SalA+MK-2206组)、NAC组和NAC+MK-2206组(简称NAC+MK-2206组)。经干预后，采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率、流式细胞仪技术分析细胞凋亡比例和ROS含量，总超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒和脂质氧化检测试剂盒检测细胞内SOD活性和丙二醛(MDA)含量，蛋白免疫印迹法检测细胞内Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、mTORC1、磷酸化mTORC1(p-mTORC1)、胞浆型磷脂酶A2(cLPA2)、Cleaved-Caspase3及Bcl-2的表达水平。
结果
(1)与对照组相比，MCA-IR组行为学评分、SOD活性、p-Akt表达降低，梗死面积、含水量、海马CA1区细胞凋亡率、MDA含量和cPLA2表达均明显增加；1.0、2.5、5.0mg/kgSalA预处理后，与MCA-IR组相比，SalA组行为学评分、SOD活性、p-Akt表达增加，梗死面积、含水量、海马CA1区细胞凋亡率、MDA含量和cPLA2表达降低(P＜0.05)。与对照组相比，MCA-IR组再灌注8、24、48h后，细胞凋亡率、cPLA2表达增加，p-Akt表达下降。与MCA-IR组相比，SalA组细胞凋亡率、cPLA2表达降低，p-Akt表达增加。与SalA组相比，LY294002+SalA组，细胞凋亡率、cPLA2表达增加，p-Akt表达下降。
(2)与对照组相比，OGD组细胞存活率、SOD活性、p-AKT、p-mTORC1、Bcl-2表达明显降低、细胞凋亡率、MDA含量、ROS含量、cPLA2、Cleaved-Caspase3表达明显增加。与OGD组相比，Sal组和NAC组细胞存活率、SOD活性、p-AKT、p-mTORC1、Bcl-2表达明显增加、细胞凋亡率、MDA含量、ROS含量、cPLA2、Cleaved-Caspase3表达明显降低。与SalA组相比，SalA+MK-2206组细胞存活率、SOD活性、p-Akt、p-mTORC1、Bcl-2表达明显降低、细胞凋亡率、MDA含量、ROS含量、cPLA2、Cleaved-Caspase3表达明显增加，NAC组无明显差异。与NAC组相比，SalA+MK-2206组细胞存活率、SOD活性、p-AKT、p-mTORC1、Bcl-2表达明显降低、细胞凋亡率、MDA含量、ROS含量、cPLA2、Cleaved-Caspase3表达明显增加。
结论
(1)SalA具有降低缺血再灌注损伤后细胞凋亡，发挥保护作用。
(2)SalA通过增加p-Akt表达，激活Akt信号通路，降低cPLA2表达，抑制缺血再灌注损伤后脑组织损伤。
(3)SalA清除细胞内氧自由基，缓解OGD诱导Akt信号通路抑制作用，降低cPLA2表达,减少脑细胞凋亡，发挥细胞保护作用。