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雪菊（Coreopsistinctoria）是一种药食同源的植物，主要生长在高原地区，特别是中国的新疆地区，具有抗糖尿病、低血脂、抗高血压、抗氧化等多种生物活性。本研究以新疆昆仑雪菊为实验材料，通过以高效液相色谱法为参考建立测定雪菊总黄酮含量的分光光度法，制备分离黄酮单体化合物并探究雪菊总黄酮的抗肝纤维化作用。具体研究内容如下：
（1）建立同时检测雪菊中6种主要化合物含量的高效液相色谱方法。采用C18反相色谱柱，流动相为乙腈与0.1%三氟乙酸水溶液，梯度洗脱，在280nm、385nm双波长下测定雪菊及杭菊、贡菊中6种主要成分的含量。结果表明，6种化合物的线性关系良好（r2≥0.9996）；雪菊与杭菊、贡菊中被检测的6种主要化合物的含量差异较大，马里苷是雪菊中的含量最高的化合物达36.5mg/g，是杭菊和贡菊含量的22.4倍和35.1倍。
（2）选用昆仑雪菊为实验原料，探究测定其提取物中总黄酮含量的最佳方法。首先，分离制备雪菊样品溶液与参照物芦丁、槲皮素、表儿茶素溶液，分别在NaNO2-Al(NO3)3/AlCl3-NaOH和Al(NO3)3/AlCl3+KAc两种体系，用UV-Vis连续波长扫描图谱，初步选择出比较适合的反应体系，做出相应体系的标准曲线。最后用相应的体系检测雪菊乙酸乙酯、雪菊正丁醇萃取物中总黄酮含量，并与用高效液相色谱法测得结果比较，确定雪菊提取物中总黄酮含量测定的最佳方法。结果表明，测定雪菊提取物中总黄酮含量的最佳方法为以芦丁为参照物的KAc-AlCl3法，在415nm波长处测得总黄酮含量为10.85%。
（3）利用高速逆流色谱仪，分离雪菊中马里苷、黄诺玛苷。用60%的乙醇冷凝回流提取法，大量制备雪菊粗提物，依次用有机溶剂石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，初步提纯，再选择乙酸乙酯-正丁醇-水（4∶1∶5，V/V）作为溶剂系统对雪菊正丁醇层萃取物进行了分离纯化，在5mL/min流速、850r/min转速和25℃分离条件下，固定相保留率为60%，50mg粗提物一次性分离得到两种化合物分别为4.9mg和15.8mg经液相色谱分析及核磁等鉴定为马里苷和黄诺玛苷，其纯度分别为99.0%和94.5%，回收率均大于97%。
（4）建立肝纤维化模型，探究雪菊总黄酮抗肝纤维化的作用机制。用CCl4诱导SD雌性大鼠，使之产生的肝纤维化。以水飞蓟素为阳性对照，正丁醇萃取的雪菊总黄酮（CTF）高、低剂量组连续灌胃给药8周后，对血清及肝组织匀浆生化指标进行检测，用苏木素-伊红和天狼星红染色，评价肝纤维化水平及胶原蛋白分泌水平。结果表明，与CCl4处理组相比较，CTF高浓度组中ALT、AST和MDA含量分别为49.22%、37.62%和36.40%，GSH含量为CCl4组的2.33倍，SOD酶活性比CCl4组高4.69倍，说明CTF能够减轻氧化应激，改善肝功能。肝组织病理结果表明CTF能够抑制肝星状细胞的活化水平和胶原的分泌。因此，我们认为定期服用CTF可以达到预防肝纤维化的作用。
（1）建立同时检测雪菊中6种主要化合物含量的高效液相色谱方法。采用C18反相色谱柱，流动相为乙腈与0.1%三氟乙酸水溶液，梯度洗脱，在280nm、385nm双波长下测定雪菊及杭菊、贡菊中6种主要成分的含量。结果表明，6种化合物的线性关系良好（r2≥0.9996）；雪菊与杭菊、贡菊中被检测的6种主要化合物的含量差异较大，马里苷是雪菊中的含量最高的化合物达36.5mg/g，是杭菊和贡菊含量的22.4倍和35.1倍。
（2）选用昆仑雪菊为实验原料，探究测定其提取物中总黄酮含量的最佳方法。首先，分离制备雪菊样品溶液与参照物芦丁、槲皮素、表儿茶素溶液，分别在NaNO2-Al(NO3)3/AlCl3-NaOH和Al(NO3)3/AlCl3+KAc两种体系，用UV-Vis连续波长扫描图谱，初步选择出比较适合的反应体系，做出相应体系的标准曲线。最后用相应的体系检测雪菊乙酸乙酯、雪菊正丁醇萃取物中总黄酮含量，并与用高效液相色谱法测得结果比较，确定雪菊提取物中总黄酮含量测定的最佳方法。结果表明，测定雪菊提取物中总黄酮含量的最佳方法为以芦丁为参照物的KAc-AlCl3法，在415nm波长处测得总黄酮含量为10.85%。
（3）利用高速逆流色谱仪，分离雪菊中马里苷、黄诺玛苷。用60%的乙醇冷凝回流提取法，大量制备雪菊粗提物，依次用有机溶剂石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，初步提纯，再选择乙酸乙酯-正丁醇-水（4∶1∶5，V/V）作为溶剂系统对雪菊正丁醇层萃取物进行了分离纯化，在5mL/min流速、850r/min转速和25℃分离条件下，固定相保留率为60%，50mg粗提物一次性分离得到两种化合物分别为4.9mg和15.8mg经液相色谱分析及核磁等鉴定为马里苷和黄诺玛苷，其纯度分别为99.0%和94.5%，回收率均大于97%。
（4）建立肝纤维化模型，探究雪菊总黄酮抗肝纤维化的作用机制。用CCl4诱导SD雌性大鼠，使之产生的肝纤维化。以水飞蓟素为阳性对照，正丁醇萃取的雪菊总黄酮（CTF）高、低剂量组连续灌胃给药8周后，对血清及肝组织匀浆生化指标进行检测，用苏木素-伊红和天狼星红染色，评价肝纤维化水平及胶原蛋白分泌水平。结果表明，与CCl4处理组相比较，CTF高浓度组中ALT、AST和MDA含量分别为49.22%、37.62%和36.40%，GSH含量为CCl4组的2.33倍，SOD酶活性比CCl4组高4.69倍，说明CTF能够减轻氧化应激，改善肝功能。肝组织病理结果表明CTF能够抑制肝星状细胞的活化水平和胶原的分泌。因此，我们认为定期服用CTF可以达到预防肝纤维化的作用。