桑叶生物碱的变化规律及其降血糖作用研究

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目前我国桑树种质资源居世界第一位,拥有丰富的桑叶资源,桑叶作为一种优良的中药材,现已经被国家卫生部列入既是食品又是药品的品种名单,桑叶作为药食两用的价值得到认可,生物碱是桑叶药理作用的主要成分之一,对其深入研究具有十分重要的意义。本文对桑叶总生物碱的提取、含量变化规律、降血糖活性及作用机制等进行了较为系统的研究,以期为桑叶生物碱的开发利用提供理论参考。主要结果如下:   (1)桑叶总生物碱的提取工艺的优化。采用盐酸-乙醇浸提法,运用中心组合原理响应面设计对桑叶总生物碱的提取工艺进行研究,获得最佳提取工艺:提取时间为120 min,乙醇浓度为30%,提取次数为2次,料液比为1:30,此条件下提取桑叶总生物碱含量为3.23 mg/g;各因素对提取率的影响大小依次为提取时间>提取次数>料液比>乙醇浓度。   (2)不同桑品种的桑叶1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimyein,DNJ)含量和总生物碱含量测定比较研究。分别采用柱前荧光衍生-高效液相色谱法和雷氏盐比色法对98个桑品种桑叶总DNJ含量和总生物碱含量进行了分析,结果表明:桑叶总生物碱和DNJ含量从总体上符合正态分布,品种间存在很大变幅,其中育7803总生物碱和DNJ含量最高,含量分别为3.73 mg/g、1.88 mg/g,同时筛选出总生物碱含量大于3 mg/g的2个桑品种,DNJ含量大于1 mg/g的4个品种。对不同染色体倍数分析,发现其对桑叶总生物碱含量和DNJ含量均未达到显著差异水平(P>0.05);对桑种分析,发现其对桑叶总生物碱含量未达到显著差异水平(P>0.05),中间型桑叶中DNJ含量显著高于其他桑种(P<0.05)。   (3)桑叶中DNJ含量的动态变化规律。通过对7个代表性桑品种7个月份桑叶中DNJ含量进行分析,得到如下规律:总体上,不同品种随着季节的变化呈现先增加后减少的趋势,在8,9月份含量达到最高。   (4)桑叶总生物碱的降血糖活性评价。通过DM(diabetes mellitus,糖尿病)小鼠体内试验和体外α-葡萄糖苷酶抑制活性试验评价桑叶总生物碱的降血糖活性,体内结果表明:与正常对照组小鼠相比,DM小鼠体重下降,进食量显著增加(P<0.05),肝脏、肾脏、脾脏指数显著增加,胸腺指数下降,血糖显著升高;与DM模型组相比,给药组体重增加,采食量下降,肝脏、肾脏指数降低,脾脏指数显著降低,胸腺指数增加,血糖随着实验的进行逐渐降低工,实验结束时,桑叶总生物碱灌胃组显著高于其他剂量组和拜糖平组。体外实验结果表明:桑叶总生物碱有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,且优于阳性对照组。   (5)桑叶总生物碱的降血糖作用机制探讨。从糖脂代谢、肝脏抗氧化水平、胰岛保护和小肠α-葡萄糖苷酶活性等四方面探讨桑叶总生物碱的降血糖作用机制,测定灌胃后DM小鼠糖耐量实验(OGTT)、肝糖原含量、己糖激酶活力和血脂水平等方面的指标。结果表明:桑叶总生物碱能提高DM小鼠的葡萄糖糖耐受能力,增加肝糖原含量以及肝脏己糖激酶活力,明显抑制小肠上皮细胞蔗糖酶活性;可以降低DM小鼠血清中TC、TG、LDL-C的含量,增加DM小鼠血清中HDL-C的含量;可以提高肝脏中CAT,SOD,GSH的水平,降低MDA水平;提高胰岛β细胞C-肽的释放,有一定修复胰岛β细胞的能力。桑叶总生物碱的降糖活性可能是主要通过抑制糖苷酶活性及胰岛保护作用来实现的。
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